Inszerciós mutagenezis alkalmazása szterinlebontásért felelős mycobacterium gének megismerésében

A tétel rövid nézete
dc.contributor.advisorSzentirmai, Attila
dc.contributor.authorAndor, Attila
dc.contributor.departmentJuhász-Nagy Pál doktori iskolahu
dc.contributor.submitterdepDE--ATC--Mezőgazdaság- Élelmiszertudományi és Környezetgazdálkodási Kar -- Biomérnöki Tanszék
dc.contributor.submitterdepDE--ATC--Mezőgazdaság- Élelmiszertudományi és Környezetgazdálkodási Kar --
dc.date.accessioned2011-10-27T09:39:17Z
dc.date.available2011-10-27T09:39:17Z
dc.date.created2011hu_HU
dc.date.defended2011-12-09
dc.description.abstractA Tn611 transzpozont hordozó pCG79 jelű hőérzékeny ingázó plazmid DNS alkalmazásával inszerciós mutáns könyvtárakat hoztunk létre szterin-hasznosító Mycobacterium smegmatis mc2155 és Mycobacterium phlei M51-Ept törzsekben szterin-átalakító képességben blokkolt mutánsok előállítása céljából. Nagy-áteresztőképességű szűrőmódszerrel 10-10 ezer törzset vizsgáltunk le mindegyik inszerciós mutáns könyvtárból. Összesen 4 törzset találtunk, amelyek szterinlebontó enzimaktivitásai különböztek a szülői törzsekétől. A 4-androsztén-3,17-diont termelő Mycobacterium phlei M51-Ept egyik blokkmutánsa a szitoszterint 23,24-dinorkolánvázas vegyületekké alakította át, amelyek hasznos kiindulási anyagai a kortikoszteroid gyógyszerek szintézisének. A 3-ketoszteroid-9α-hidroxiláz aktivitásban gátolt Mycobacterium smegmatis 10A12 jelű blokkmutáns genomiális DNS-éből egy pFJ92-nek elnevezett rekombináns plazmidot nyertünk ki, amely tartalmazta a kromoszómába integrálódott transzpozont és a kapcsolódó kromoszómális régiókat. A pFJ92 plazmidot használtuk fel a 9α-hidroxilázt kódoló kromoszómális DNS izolálására. Az izolált ORF kódolja a 383 aminosavat tartalmazó 3-ketoszteroid-9α-hidroxiláz enzimet M. smegmatis mc2155-ben, amelyben jelen vannak az IA osztályba tartozó terminális oxigenázokban jellemzően konzervált domének. Az izolált génnel transzformált Escherichia coli képessé vált a szterán váz 9α-hidroxilezésére. Integration of the pCG79 temperature-sensitive plasmid carrying Tn611 was used to generate libraries of mutants with blocked sterol transforming ability of the sterol-utilizing strains Mycobacterium smegmatis mc2155 and Mycobacterium phlei M51 Ept. Of the 10,000 insertional mutants screened from each library, four strains with altered activity of the sterol-degrading enzymes were identified. A blocked mutant of the 4-androstene-3,17-dione-producing M. phlei transformed sitosterol to 23,24-dinorcholane derivatives that are useful starting materials for corticosteroid syntheses. A recombinant plasmid, pFJ92, was constructed from the genomic DNA of one of the insertional mutants of M. smegmatis, 10A12, which was blocked in 3-ketosteroid 9α-hydroxylation and carrying the transposon insertion and flanking DNA sequences, and used to isolate a chromosomal fragment encoding the 9α-hydroxylase. The open reading frame encodes the 383-amino acid terminal oxygenase of 3-ketosteroid 9α-hydroxylase in M. smegmatis mc2155 and has domains typically conserved in class IA terminal oxygenases. Escherichia coli containing the gene could hydroxylate the steroid ring at the 9α-position.hu_HU
dc.format.extent82hu_HU
dc.identifier.urihttp://hdl.handle.net/2437/116190
dc.language.isohuhu_HU
dc.language.isoenhu_HU
dc.subject3-ketoszteroid-9α-hidroxilázhu_HU
dc.subject3-ketosteroid 9α-hydroxylasehu_HU
dc.subjectoldallánc lebontás
dc.subjectblokkmutáns
dc.subjectszteroid gyógyszer
dc.subjectszitoszterin
dc.subjectintermedier
dc.subjectszterinlebontási útvonal
dc.subjectinszerciós mutáns könyvtár
dc.subjectMycobacterium phlei
dc.subjectMycobacterium smegmatis
dc.subjectgén
dc.subjectside chain degradation
dc.subjectblocked mutant
dc.subjectsteroid drug
dc.subjectsitosterol
dc.subjectintermediate
dc.subjectsterol degradatoin pathway
dc.subjectinsertional mutant library
dc.subjectMycobacterium phlei
dc.subjectMycobacterium smegmatis
dc.subjectgene
dc.subject.sciencefieldTermészettudományokhu
dc.titleInszerciós mutagenezis alkalmazása szterinlebontásért felelős mycobacterium gének megismerésébenhu_HU
dc.title.translatedApplication of Insertional Mutagenesis to Identify Genes Responsible for Sterol Degradation in Mycobacteriumhu_HU
Fájlok
Eredeti köteg (ORIGINAL bundle)
Megjelenítve 1 - 6 (Összesen 6)
Nincs kép
Név:
Doktori ertekezes_AA.doc
Méret:
2.88 MB
Formátum:
Microsoft Word
Leírás:
Az értekezés magyarul - Nem hozzáférhető
Letöltés
Nincs kép
Név:
Doktori ertekezes_AA.pdf
Méret:
1.97 MB
Formátum:
Adobe Portable Document Format
Leírás:
Az értekezés magyarul - Nem hozzáférhető
Letöltés
Nincs kép
Név:
tezisek_magyar-angol_AA.doc
Méret:
1.87 MB
Formátum:
Microsoft Word
Leírás:
A tézisek magyarul és angolul - Nem hozzáférhető
Letöltés
Nincs kép
Név:
tezisek_magyar-angol_AA.pdf
Méret:
1.3 MB
Formátum:
Adobe Portable Document Format
Leírás:
A tézisek magyarul és angolul - Nem hozzáférhető
Letöltés
Nincs kép
Név:
Doktori ertekezes_AA-t.pdf
Méret:
1.95 MB
Formátum:
Adobe Portable Document Format
Leírás:
Az értekezés magyarul
Letöltés
Nincs kép
Név:
tezisek_magyar-angol_AA-t.pdf
Méret:
1.3 MB
Formátum:
Adobe Portable Document Format
Leírás:
A tézisek magyarul és angolul
Letöltés
Gyűjtemények
Juhász-Nagy Pál Doktori Iskola