MiRNS expresszió változásának tanulmányozása glioblasztómában

Dátum
Folyóirat címe
Folyóirat ISSN
Kötet címe (évfolyam száma)
Kiadó
Absztrakt

A gliolasztóma multiforme (GBM) a leggyakoribb és legnehezebben kezelhető primer agytumor, ami a központi idegrendszert érinti. A terápiás fejlődések ellenére a malignus gliomák korai diagnosztizálása és sikeres kezelése továbbra is nagy kihívást jelent. Munkánkat, mely a miRNS szerepének vizsgálata a glioblasztóma detektálásában, a DE Idegsebészeti Klinikájával, Dr. Klekner Álmos vezetésével kollaborációban végezzük. A mintákat a vizsgálatokhoz folyadékbiopsziából nyerjük. A folyadékbiopszia egy nem vagy minimálisan invazív módszer, amivel gyorsan és költséghatékonyan vagyunk képesek információkat szerezni a tumorról. Első lépésként miRNS frakciót is tartalmazó total RNS-t izoláltunk 6 kontroll és 6 GBM-es beteg vérplazmájából 30ng/μl koncentrációban Nanostringgel történő méréshez. A Nanostring technológia egy ultraszenzitív, reprodukálható, multiplex módszer a miRNS detektálásához. A miRNS detektálást reverz transzkripció nélkül hajtjuk végre és a hibridizáció módszerén alapúl. Az analízis eredményeképpen 59 miRNS esetén kaptunk szignifikáns miRNS expressziós szintváltozást a glioblasztómás mintákban a kontroll mintákhoz képest. A Nanostinges mérési eredmények validálása során 26 GBM-es beteg, illetve 28 kontroll személy plazma mintáiból a miRNeasy Serum/Plasma Kit (Qiagen) segítségével izolált totál RNS-t cDNS-be írtuk át a miScript II RT Kit-et alkalmazva (Qiagen). A cDNS-t templátként használva kvantitatív real-time PCR reakció keretében a miScript SYBR Green PCR Kit-el (Qiagen) meghatároztuk a hsa-miR-29a-3p, illetve hsa-miR-133a-3p expressziós szintjét. A relatív expressziójuk meghatározásához az RT-qPCR reakció során referens miRNS-ként a hsa-miR-16-5p-t használtuk. Az eredményeket összefoglalva megállapítható, hogy sikerült szignifikáns expressziós különbséget mutató miRNS-eket azonosítani a GBM-es plazma mintákban a kontroll mintákhoz képest, amelyeket további nagyszámú mintákon validálva fontos szerepet játszhatnak a folyadékbiopsziából történő biomarkerek azonosításában.

Leírás
Kulcsszavak
glioblasztóma, miRNS, expresszió változás
Forrás