dc.contributor.advisor	Vámosi György
dc.contributor.author	Szalóki Nikoletta Margit
dc.contributor.department	Molekuláris orvostudomány doktori iskola	hu
dc.contributor.submitterdep	DE--Általános Orvostudományi Kar -- Biofizikai és Sejtbiológiai Intézet
dc.date.accessioned	2015-11-29T12:20:52Z
dc.date.available	2015-11-29T12:20:52Z
dc.date.defended	2015-12-15
dc.date.issued	2015
dc.description.abstract	A c-Fos és c-Jun transzkripciós faktorok, melyek az aktivátor protein-1 (AP-1) családba tartoznak, különböző sejtfolyamatok szabályozásában vesznek részt, mint például a sejtproliferáció, differenciáció, apoptózis és onkogenezis. A c-Fos és c-Jun család fehérjéi leucin cipzárral összekapcsolódó dimerként működnek és számos emlős gén promóter és enhanszer régióiban az AP-1 szabályozó elemeihez kötődnek. A c-Jun fehérjék homodimert, illetve c-Fos fehérjékkel heterodimert alkothatnak. Ezzel szemben korábban számos közleményben leírták, hogy az izolált c-Fos leucin cipzár in vitro nem alkot stabil homodimert. Élő sejtben nem álltak rendelkezésre adatok a c-Fos homodimerizációval kapcsolatban. Kísérleteink során arra kerestük a választ, hogy a túltermelt mennyiségben jelenlevő c-Fos transzkripciós faktor képes-e homodimert alkotni, ugyanis egyes tumorok a c-Fos-t önmagában túltermelik. A dimerizáció létrejöttét fluoreszcencia rezonancia energia transzfer (FRET) technikával konfokális mikroszkóp és áramlási citométer segítségével, illetve fluoreszcencia korrelációs spektroszkópiával (FCS) vizsgáltuk élő HeLa sejtekben. Vizsgálatainkhoz ECFP-EYFP, illetve EGFP-mRFP1 donor-akceptor párral jelölt c-Fos, c-Jun fúziós fehérjéket, illetve ezek mutánsait használtuk. Dimer transzkripciós faktorok létrejöttének feltétele, hogy legyen asszociáció, ami függ a koncentrációtól és a disszociációs állandótól. Kidolgoztunk egy „FRET titrálási” módszert, melynek segítségével meghatároztuk a c-Fos‒c-Jun heterodimerek és a c-Fos homodimerek disszociációs állandóját élő sejtekben. Emellett kidolgoztunk egy eljárást a fluoreszkáló transzfektált, és nem fluoreszkáló endogén fehérjék abszolút koncentrációjának mérésére élő sejtekben, amely koncentrációkat figyelembe vettük a disszociációs állandók meghatározásánál.	hu_HU
dc.description.abstract	The c-Fos and c-Jun transcription factors, members of the activator protein-1 (AP-1) complex, form heterodimers and bind to DNA via a basic leucine zipper, and regulate the cell cycle, apoptosis, differentiation, etc. Purified c-Jun leucine zipper fragments could also form stable homodimers, whereas c-Fos leucine zipper homodimers were found to be much less stable in earlier in vitro studies. The importance of c-Fos overexpression in tumors and the controversy in the literature concerning c-Fos homodimerization prompted us to investigate Fos homodimerization. FRET and molecular brightness analysis of fluorescence correlation spectroscopy data from live HeLa cells transfected with fluorescent protein-tagged c-Fos indicated that c-Fos formed homodimers. We developed a method to determine the absolute concentrations of transfected and endogenous c-Fos and c-Jun, which allowed us to determine dissociation constants of c-Fos homodimers (Kd=6.7±1.7 μM) and c-Fos–c-Jun heterodimers (on the order of 10-100 nM) from FRET titrations. Imaging fluorescence cross-correlation spectroscopy and molecular modeling simulations confirmed that c-Fos homodimers were stably associated and could bind to the chromatin. Our results establish c-Fos homodimers as a novel form of the AP-1 complex, which may be an autonomous transcription factor in c-Fos overexpressing tissues, and could contribute to tumor development.	hu_HU
dc.description.corrector	NE
dc.format.extent	87	hu_HU
dc.identifier.uri	http://hdl.handle.net/2437/219936
dc.language.iso	hu	hu_HU
dc.language.iso	en	hu_HU
dc.subject	Fos homodimerizáció	hu_HU
dc.subject	Fos homodimerisation	hu_HU
dc.subject	transzkripciós faktor
dc.subject	disszociációs állandó
dc.subject	fluoreszcencia rezonancia energia transzfer
dc.subject	konfokális mikroszkópia
dc.subject	áramlási citometria
dc.subject	fluoreszcencia korrelációs spektroszkópia
dc.subject	lézer pásztázó citométer
dc.subject	transcription factor
dc.subject	dissociation constant
dc.subject	fluorescence resonance energy transfer
dc.subject	confocal microscopy
dc.subject	flow cytometry
dc.subject	fluorescence correlation spectroscopy
dc.subject	laser scanning cytometer
dc.subject.discipline	Elméleti orvostudományok	hu
dc.subject.sciencefield	Orvostudományok	hu
dc.title	c-Fos transzkripciós faktor hetero- és homodimerizációjának kvantitatív vizsgálata élő HeLa sejtekben	hu_HU
dc.title.translated	Quantitative examination of hetero- and homodimerization of c-Fos transcription factor in live HeLa cells	hu_HU
dc.type	PhD, doktori értekezés	hu

c-Fos transzkripciós faktor hetero- és homodimerizációjának kvantitatív vizsgálata élő HeLa sejtekben

Fájlok

Eredeti köteg (ORIGINAL bundle)

Engedélyek köteg

Gyűjtemények