dc.contributor.advisor	Panyi, György
dc.contributor.advisor	Krasznai, Zoltán
dc.contributor.author	Tóth, Ágnes
dc.contributor.department	Molekuláris orvostudomány doktori iskola	hu
dc.contributor.submitterdep	DE--OEC--Általános Orvostudományi Kar -- Biofizikai és Sejtbiológiai Intézet
dc.date.accessioned	2012-11-21T09:06:32Z
dc.date.available	2012-11-21T09:06:32Z
dc.date.defended	2012-12-05
dc.date.issued	2012
dc.description.abstract	Patch-clamp technikával, feszültség-zár üzemmódban elvégeztük a D10 sejtek biofizikai és farmakológiai karakterizálását, melynek során a kétpórusú TASK K+ csatornák jelenlétét kizárva kimutattuk, hogy ezen egér TH2 sejtvonal domináns feszültség-függő K+ csatornája a Kv1.3. A CH12-LX antigénprezentáló sejteket felhasználva beállítottunk egy modellrendszert az immunológiai szinapszis tanulmányozására. Az endogén Kv1.3 csatornákat extracelluláris epitóp ellen termeltetett antitesttel, indirekt módszerrel jelöltük meg, majd meghatároztuk a Kv1.3 csatornák sejtfelszíni eloszlását az immunológiai szinapszis kialakulását követően. Konfokális mikroszkópos felvételeink kimutatták, hogy a T sejtek Kv1.3 ioncsatornái a két sejt közötti kontaktrégióba rendeződnek. Összehasonlítottuk az egyedülálló és a szinapszisban lévő T sejtek Kv1.3 áramait, megállapítottuk hogy az aktivációs kinetika lelassult, ezzel szemben az áram inaktivációja felgyorsult a szinapszisban lévő sejtekben az egyedülálló sejtekhez képest, de a Kv1.3 csatornák egyensúlyi aktivációjának membránpotenciál-függését jellemző normált konduktancia–tesztpotenciál összefüggés nem változott szignifikáns mértékben. Azért, hogy ennek a hátterét minél jobban megismerjük a D10 sejteket PKA, PKC és p56lck gátlószerekkel kezeltük. Az aktivációs kinetikát jellemző időállandó és a normált konduktancia feszültségfüggését jellemző paraméterek nem különböztek jelentősen a kezelt és a kezeletlen sejtek között, azonban az inaktivációs időállandókban szignifikáns csökkenést tapasztaltunk a kezelések hatására, azaz az áram inaktivációja felgyorsult, amely feltételezéseink szerint a csatorna szinapszisbeli defoszforlációjával hozható összefüggésbe. Továbbá, szintén teljes-sejt konfigurációban megvizsgáltuk az egészséges és sclerosis multiplexes donoroktól származó naiv és regulátor T sejtek ioncsatorna-expressziós mintázatát. Megmértük az egyes sejteken található Kv1.3 és IKCa1 csatornák számát, valamint megvizsgáltuk a kapuzására vonatkozó paramétereket is, majd statisztikai összehasonlítást végeztünk a különböző populációk között. Megállapítottuk, hogy az egészséges donorok naiv és Treg sejtjei azonos számú Kv1.3 csatornát fejeznek ki, ugyanakkor a Treg sejtek membránkapacitása nagyobbnak bizonyult, mint a naiv sejteké, és így csatornadenzitásuk alacsonyabbnak adódott. Ezzel szemben, a sclerosis multiplexes betegek Treg sejtjei kevesebb Kv1.3 csatornával rendelkeztek, mint a naiv sejtek, és membránfelszínük sem volt nagyobb a naiv sejtekénél. We carried out biophysical and pharmacological characterization of whole-cell K+ current in D10 cells by patch-clamp technique in voltage-clamp mode. Excluding the presence of the two-pore TASK channels, we pointed out that this TH2 murine cell line predominantly expresses Kv1.3 channels. Using the CH12-LX cell line as antigen presenting cells we set a model system for studying the immunological synapse. We determined the cell surface distribution of Kv1.3 channels after the formation of the immunological synapse by labeling endogenous Kv1.3 channels against their extracellular epitope indirectly. Our confocal microscopy images demonstrated that Kv1.3 channels of these T cells accumulate in the contact region of the T cell – APC conjugate. We compared the Kv1.3 currents, kinetic and steady-state parameters measured in standalone and APC-engaged cells. We found that activation kinetics slowed down, while inactivation rate increased in cells participating in the immune synapse, and we did not find significant difference in voltage-dependence of steady-state activation between standalone and T cells in the immunological synapse by plotting the normalized conductance as a function of test potential. To clarify its background we applied PKA, PKC and p56lck inhibitors. The activation kinetics and the voltage-dependence of steady-state activation were not altered by PK inhibitors, however, our statistical comparison proved that the decrease in inactivation time constant was significant in treated cells compared to the control group. We suppose this phenomenon to be associated with the dephosphorylation of the channel protein in the immunologiacal synapse. Furthermore, we investigated the pattern of ion channel expression of naïve and regulatory T cells isolated from healthy volunteers and from patients with multiple sclerosis. We measured the numbers of the voltage-gated Kv1.3 and the Ca2+-activated IKCa1 channels, studied the gating of these channels, then we performed a statistical analysis among the different populations. Although, we did not find significant difference in gating parameters of Kv1.3 and the number of IKCa1 channles, we determined that the naïve and regulatory T cells of healthy donors express the same amount of Kv1.3 channels, and that the membrane capacitance is higher of regulatory T cells, thus the channel density is lower, while the Treg population from MS patients expresses fewer Kv1.3 channels and their surface is not significantly larger compared to their naïve counterparts.	hu_HU
dc.description.corrector	NE
dc.format.extent	89	hu_HU
dc.identifier.uri	http://hdl.handle.net/2437/152665
dc.language.iso	hu	hu_HU
dc.language.iso	en	hu_HU
dc.subject	Immunológiai szinapszis	hu_HU
dc.subject	Immunological synapse	hu_HU
dc.subject	Kv1.3 csatorna
dc.subject	TASK csatorna
dc.subject	foszforiláció
dc.subject	protein kináz
dc.subject	regulátor T sejt
dc.subject	autoimmunitás
dc.subject	sejt kapacitás
dc.subject	csatornasűrűség
dc.subject	Kv1.3 channels
dc.subject	TASK channels
dc.subject	phosphorylation
dc.subject	protein kinase
dc.subject	regulatory T cell
dc.subject	autoimmunity
dc.subject	cell capacitance
dc.subject	channel density
dc.subject.discipline	Elméleti orvostudományok	hu
dc.subject.sciencefield	Orvostudományok	hu
dc.title	A Kv1.3 K+ csatornák kapuzásának és expressziójának jellemzése T sejtekben	hu_HU
dc.title.translated	Characterization of Kv1.3 K+ ion channel expression and gating in T lymphocytes	hu_HU
dc.type	PhD, doktori értekezés	hu

A Kv1.3 K+ csatornák kapuzásának és expressziójának jellemzése T sejtekben

Fájlok

Eredeti köteg (ORIGINAL bundle)

Gyűjtemények