A stapes fixációk etiopathogenezisének vizsgálata

Csomor, Péter

A stapes fixációk etiopathogenezisének vizsgálata

dc.contributor.advisor	Karosi, Tamás
dc.contributor.author	Csomor, Péter
dc.contributor.department	Klinikai orvostudományok doktori iskola	hu
dc.contributor.submitterdep	DE--OEC--Általános Orvostudományi Kar -- Fül-Orr-Gégészeti és Fej-Nyaksebészeti Klinika
dc.contributor.submitterdep	DE--ATC--Mezőgazdaság- Élelmiszertudományi és Környezetgazdálkodási Kar -- DE--ATC--Mezőgazdaság- Élelmiszertudományi és Környezetgazdálkodási Kar --
dc.contributor.submitterdep	DE--ATC--Mezőgazdaság- Élelmiszertudományi és Környezetgazdálkodási Kar -- DE--ATC--Mezőgazdaság- Élelmiszertudományi és Környezetgazdálkodási Kar --
dc.contributor.submitterdep	DE--ATC--Mezőgazdaság- Élelmiszertudományi és Környezetgazdálkodási Kar -- DE--ATC--Mezőgazdaság- Élelmiszertudományi és Környezetgazdálkodási Kar --
dc.contributor.submitterdep	DE--ATC--Mezőgazdaság- Élelmiszertudományi és Környezetgazdálkodási Kar -- DE--ATC--Mezőgazdaság- Élelmiszertudományi és Környezetgazdálkodási Kar --
dc.contributor.submitterdep	DE--ATC--Mezőgazdaság- Élelmiszertudományi és Környezetgazdálkodási Kar -- DE--ATC--Mezőgazdaság- Élelmiszertudományi és Környezetgazdálkodási Kar --
dc.contributor.submitterdep	DE--ATC--Mezőgazdaság- Élelmiszertudományi és Környezetgazdálkodási Kar --
dc.date.accessioned	2012-09-17T07:12:16Z
dc.date.available	2012-09-17T07:12:16Z
dc.date.created	2012	hu_HU
dc.date.defended	2012-10-26
dc.date.issued	2012-09-17T07:12:16Z
dc.description.abstract	ÖSSZEFOGLALÁS Elméleti háttér: A stapes fixációk etiopathogenetikai háttere eltérő lehet, közülük egy a mai napig tisztázatlan maradt. Az otosclerosis a capsula otica csontremodellációs zavara, aminek következtében a stapes talp rögzülése és a cochleában zajló endostealis osteolysis eredményeként progresszív vezetéses-és/vagy szenzorineurális halláscsökkenés alakul ki. Anyagok és módszerek: Ez a tanulmány három kísérleten alapszik: 1. A stapes talpakat szövettani és molekuláris biológiai módszerekkel vizsgáltuk. Az RNS-t kivontuk a mintákból. A kanyaróvírus kimutatását egy nukleoprotein RNS-specifikus RT-PCR segítségével végeztük el. Az alternatív splicing-on átment CD46 izoformák RNS-ét RT-PCR segítségével amplifikáltuk, az amplimereket poliakrilamid gélelektroforézissel elkülönítettettük, a gélből kinyertük az egyes variánsokat. Az amplimereket olyan restrikciós enzimekkel hasítottuk, amelyeknek a CD46-ra specifikus felismerőhelyeik vannak. A kanyaróvírus ellenes IgG szinteket ELISA segítségével határoztuk meg. 2. A stapes talpakat haematoxylin-eozin festéssel és TNFRI/II specifikus immunofluoreszcens assay-el vizsgáltuk. 3. A stapes talpakat haematoxylin-eozin festéssel és hCIAP1/2, és Granzyme-β specifikus immunofluoreszcens assay-el vizsgáltuk. Eredmények: A kanyaróvírus RNS-t csak otosclerosisos mintákból sikerült kimutatni. Mintáink öt CD46 variáns expressziójával voltak jellemezhetőek (c, d, e, f, és egy ismeretlen variáns). Otosclerosisos mintáknál az „f” és az ismeretlen variáns fokozott expresszióját észleltük. A kanyaró-ellenes IgG szint alacsonyabb volt otosclerosisos betegeknél, mint a nem-otosclerosisosoknál. Az aktív otosclerosisos esetekben a TNFRII fokozottan, a TNFRI mérsékelten expresszálódott. Az inaktív otosclerosisos esetekben a TNFRI permanensen kifejeződött, de a TNFRII expressziója elenyésző volt. A kontroll mintáknál a TNF-α receptorok alig fejeződtek ki. Aktív otosclerosisos mintáknál a hCIAP1/2 markánsan, a Granzyme-β alig expresszálódott. Az inaktív otosclerosisos mintáknál a Gramzyme-β erőteljesen, a hCIAP1/2 elhanyagolhatóan expresszálódott. A kontroll mintáknál nem volt számottevő Granzyme-β immunreakció, s az apoptózis inhibitorok is csak mérsékelten fejeződtek ki. Megbeszélés: Az „f” variáns és az ismeretlen rövid variáns fokozott expressziója valamint a capsula otica speciális CD46 expressziós mintázata megváltozott, vagy kóros sejten belüli jelátviteli folyamatokat eredményezhet, lehetőséget adva a perzisztáló kanyaróvírus fertőzés kialakulásának. Az otosclerosist kísérő fokozott TNF-α receptor expresszió igazolja az aktivált osteoclastok intenzív anyagcseréjének és a gyulladásos reakcióutaknak a szerepét. Az otosclerosis szövettanilag aktív és inaktív szakaszában az apoptózis inhibitorok és inducerek expressziója ellentétes, ez a sejtek túlélésének/apoptózisának szabályozási zavarait feltételezi az otosclerosisban. SUMMARY Background: The etiopathogenesis of stapes fixations is different, one of them still remained unclear. Otosclerosis is a bone remodelling disorder of the human otic capsule, that leads to progressive and sensorineural hearing loss as a consequence of stapes footplate fixation and cochlear bone resorption with endosteal involvement. Materials and methods: This study based on three experiment: 1. Stapes footplates were analyzed by histopathological and molecular biological methods. Nucleic acids were extracted. Measles virus was detected by nucleoprotein RNA-specific RT-PCR. Alteratively spliced RNA of CD46 isoforms was amplified by RT-PCR; cDNA amplimers were separated by poly-acrylamide gel electrophoresis and were purified from the gel. Amplimers of CD46 isoforms was restricted by endonuclease enzymes having CD46-specific recognition sites. Anti-measles IgG serum levels were measured by ELISA. 2. Stapes footplates were analyzed by haematoxylin-eosin staining and TNFRI/II specific immunofluorescent assay was performed. 3. Stapes footplates were analyzed by haematoxylin-eosin staining and hCIAP1/2 and Granzyme-β specific immunofluorescent assays were performed. Results: The presence of measles virus was associated only with the histological diagnosis of otosclerosis. All specimens were characterized by the expression of five CD46 variants (c, d, e, f and one unknown isoform). Otosclerotic specimens were featured by increased expression levels of variant ’f’ and the unknown isoform. Anti-measles IgG levels were lower in the sera of patients with otosclerosis in contrast to the nonotosclerotic stapes fixations. Active otosclerosis was featured by increased expression of TNFRII and moderate expression of TNFRI; inactive cases were characterized by permanent expression of TNFRI; however, TNFRII-specific immunoreaction was absent. Nonotosclerotic stapes specimens showed a negligible TNFR expression. Active otosclerosis was featured by robust expression of hCIAP1/2 and negligible expression of Granzyme-β. Inactive cases of otosclerosis showed inverse reaction: Granzyme-β was highly expressed; however, hCIAP1/2 specific immunoreactions were absent. Nonotosclerotic and normal stapes specimens showed no considerable Granzyme-β expression and moderate hCIAP1/2 expression. Conclusion: Increased expression levels of the variant ’f’ and the unknown shorter isoform as well as the special CD46 expression pattern of the human otic capsule might produce modified or pathological intracellular signalization that could create the possibility of persistent measles virus infection. Detection of elevated TNFR expression demonstrates activated osteoclast metabolism and inflammatory pathways in otosclerosis. Detection of the inversely expressed apoptosis inhibitors and inducers in active and inactive stages of otosclerosis demonstrates pathologic regulation of cell survival and apoptosis.	hu_HU
dc.description.corrector	NE
dc.format.extent	120	hu_HU
dc.identifier.uri	http://hdl.handle.net/2437/132119
dc.language.iso	hu	hu_HU
dc.language.iso	en	hu_HU
dc.subject	alternatív splicing	hu_HU
dc.subject	alternative splicing	hu_HU
dc.subject	TNF-α
dc.subject	stapes ankylosis
dc.subject	otosclerosis
dc.subject	kanyaróvírus
dc.subject	gyulladás
dc.subject	gyógyszeres kezelés
dc.subject	apoptózis
dc.subject	stapes ankylosis
dc.subject	pharmaceutical treatment
dc.subject	measles virus
dc.subject	inflammation
dc.subject	CD46
dc.subject	apoptosis
dc.subject.discipline	Klinikai orvostudományok	hu
dc.subject.sciencefield	Orvostudományok	hu
dc.title	A stapes fixációk etiopathogenezisének vizsgálata	hu_HU
dc.title.translated	Etiopathogenesis of stapes fixations	hu_HU