GST és His-MBP fúziós címke-fehérjék affinitás felületekkel való kölcsönhatásának vizsgálata

A tétel rövid nézete
dc.contributor.advisorMótyán, János András
dc.contributor.advisorMiczi, Márió
dc.contributor.advisordeptDebreceni Egyetem::Általános Orvostudományi Karhu_HU
dc.contributor.advisordeptBiokémiai és Molekuláris Biológiai Intézethu_HU
dc.contributor.authorTakács, Viktória
dc.contributor.departmentDE--Általános Orvostudományi Karhu_HU
dc.contributor.opponentTóth, Ferenc
dc.contributor.opponentdeptDebreceni Egyetem::Fogorvostudományi Karhu_HU
dc.contributor.opponentdeptBioanyagtani és Fogpótlási nem önálló Tanszékhu_HU
dc.date.accessioned2021-06-22T17:16:11Z
dc.date.available2021-06-22T17:16:11Z
dc.date.created2020
dc.description.abstractA fúziós címkék felhasználásának célja lehet az oldékonyság növelése, a folding segítése, a detektálhatóság biztosítása vagy a tisztítás megkönnyítése. A leggyakrabban alkalmazott fúziós címkék glutation-S-transzferáz (GST) és hexahisztidin-konjugált maltóz kötő fehérje (His-MBP), amelyek affinitás-felületekkel való kölcsönhatásának vizsgálata fontos információkkal szolgálhat tisztításuk és alkalmazhatóságuk szempontjából. A GST és His-MBP fehérjék expresszálása pGEX-4T-3 és pDest-His-MBP-mApple plazmidokkal transzfektált Escherichia coli BL21 (DE3) sejtekben történt. A fehérjék expresszálását követően elvégeztük a sejtek feltárását, majd megvizsgáltuk a fehérjék kölcsönhatását glutation-, amilóz- és nikkel-nitrilotriacetát (Ni-NTA) affinitás felületekkel. A mosási és elúciós lépéseket követően denaturáló poliakrilamid gélelektroforézis segítségével vizsgálódtunk tovább, majd a géleket denzitometriásan is kiértékeltük. Legvégül ún. biolayer interferometria segítségével megvizsgáltuk a GST és His-MBP fehérjék antitest-alapú kötőfelszínhez való kötődését. Kísérleteink azt az eredményt hozták, hogy a GST és a His-MBP fehérjék erősen kötődnek a glutation és Ni-NTA affinitás felszínekhez, ellenben az amilóz affinitás felülettel egyik fehérje sem alakít ki kölcsönhatást. Az anti-His antitest-alapú felszín specifikus kölcsönható felületet biztosít, melyhez a GST nem képes kötődni. Összességében tehát elmondható, hogy a GST és His-MBP fehérjék egyaránt képesek kötődni az Ni-NTA affinitás felülethez. Ez befolyásolhatja a kísérletes eredményeket GST és His-MBP fúzionált fehérjék ezen a felszínen történő együttes alkalmazása esetén. Igazoltuk, hogy a His-MBP kötésére antitest-alapú felület (interferometria) biztosíthat specifikusabb kötőfelszínt, melyhez a GST és a BSA sem kötődik. Eredményeink alapján a GST-fúzionált fehérjék tisztítása során egy Ni-NTA előtisztítási lépés beiktatása növelheti a tisztítás hatékonyságát.  hu_HU
dc.description.coursemolekuláris biológiahu_HU
dc.description.courseactnappalihu_HU
dc.description.courselangmagyarhu_HU
dc.description.coursespecBiokémia-genomikahu_HU
dc.description.degreeMSc/MAhu_HU
dc.format.extent37hu_HU
dc.identifier.urihttp://hdl.handle.net/2437/312684
dc.language.isohuhu_HU
dc.subjectGSThu_HU
dc.subjectHis-MBPhu_HU
dc.subjectFúziós címkehu_HU
dc.subject.dspaceDEENK Témalista::Biológiai tudományokhu_HU
dc.titleGST és His-MBP fúziós címke-fehérjék affinitás felületekkel való kölcsönhatásának vizsgálatahu_HU
Fájlok
Gyűjtemények
Hallgatói dolgozatok (Általános Orvostudományi Kar)