Transzgén indukció optimalizálása embrionális őssejt eredetű differenciált prekurzorokban

A tétel rövid nézete
dc.contributor.advisorSzatmári, István
dc.contributor.advisordeptDebreceni Egyetem::Általános Orvostudományi Kar::Biokémiai és Molekuláris Biológiai Intézethu_HU
dc.contributor.authorKunkli, Barbara
dc.contributor.departmentDE--Általános Orvostudományi Karhu_HU
dc.contributor.opponentSipos, Adrienn
dc.contributor.opponentdeptDebreceni Egyetem::Általános Orvostudományi Kar::Orvosi Vegytani Intézethu_HU
dc.date.accessioned2021-02-12T15:31:27Z
dc.date.available2021-02-12T15:31:27Z
dc.date.created2020
dc.description.abstractAz embrionális őssejtek differenciálatlan állapotban lévő pluripotens sejtek, amelyek képesek önmegújulásra, és különböző szövet- és sejttípusokká történő átalakulásra is. Tenyésztés és differenciáltatás során myeloid progenitor sejteken keresztül leukocita sejtek hozhatók létre. Munkám során olyan genetikailag módosított sejtvonalakkal dolgozok, amelyek mCherry reportergént tartalmaznak és kémiai indukció (doxiciklin kezelés) hatására a transzgén bekapcsolható. Korábbi vizsgálataink során kiderült, hogy a geneticinnel (G418) újra szelektált differenciálatlan tenyészetekben a beépített transzgén a sejtek közel 100%-ban indukálható. A jelen munkám fő célja az mCherry indukálhatóságának feltérképezése ex vivo differenciáltatott sejteken különféle kondíciók mellett. Kísérleteim során az embrionális őssejtek differenciáltatása OP9 sztrómasejt ko-kultúra jelenlétében történik, a mezodermális fejlődési fázis eléréséig, az ötödik napig. Ezt követően a sejteket a ko-kultúrával együtt, GM-CSF tartalmú felülúszót tartalmazó tápfolyadékon tenyésztem tovább. A differenciálással párhuzamosan a reporter gén termelődését, illetve a vérképző sejtekre jellemző CD45 expressziót áramlási citometriai mérésekkel határoztam meg. Méréseim feltárták, hogy a differenciáltatás korai fázisában történő doxiciklin kezeléssel (génindukció az 5. naptól) érhető el a legnagyobb mértékű transzgén indukció, hiszen ebben az esetben a sejtek közel 100%-a mCherry pozitív volt. Ha viszont a differenciálás későbbi fázisában indukáltam a transzgént, akkor csak a sejtek egy része expresszálta a reportergént. A további kísérletek során a doxiciklin koncentrációjának hatását vizsgáltam. Az általában használt 1 mg/ml koncentrációval szemben a 0,1 mg/ml koncentráció is elegendőnek bizonyult a reporter fehérje expressziójának a fokozásához, bár ez a koncentrációfüggő hatás sejtklónonként eltérő eredményt mutatott. Összefoglalva eredményeim szerint a részlegesen differenciálódott sejteken csak akkor kapunk maximális génindukciót, ha kémiai induktort a sejtátalakulás viszonylag korai szakaszában adjuk.hu_HU
dc.description.coursemolekuláris biológiahu_HU
dc.description.courseactnappalihu_HU
dc.description.courselangmagyarhu_HU
dc.description.coursespecBiokémia-genomikahu_HU
dc.description.degreeMSc/MAhu_HU
dc.format.extent41hu_HU
dc.identifier.urihttp://hdl.handle.net/2437/302256
dc.language.isohuhu_HU
dc.subjectembrionális őssejthu_HU
dc.subjectmCherryhu_HU
dc.subjecttranszgénhu_HU
dc.subject.dspaceDEENK Témalista::Biológiai tudományokhu_HU
dc.titleTranszgén indukció optimalizálása embrionális őssejt eredetű differenciált prekurzorokbanhu_HU
Fájlok
Gyűjtemények
Hallgatói dolgozatok (Általános Orvostudományi Kar)