Kv1.3 feszültségfüggő ioncsatornák cisztein mutánsainak létrehozása

A tétel rövid nézete
dc.contributor.advisorVarga, Zoltán
dc.contributor.authorBuzás, Rebeka Franciska
dc.contributor.departmentDE--Természettudományi és Technológiai Kar--Biológiai és Ökológiai Intézethu_HU
dc.date.accessioned2017-05-10T09:29:26Z
dc.date.available2017-05-10T09:29:26Z
dc.date.created2017-05-09
dc.description.abstractA Kv1.3 feszültségfüggő káliumcsatornán elvégzett mutagenezis célja olyan cisztein mutánsok létrehozása volt amely feszültség-zár fluorometria (VCF) technikával vizsgálható,illetve megfelelő információt nyújt a pórusformáló domén és a feszültség szenzor domén térbeli és működésbeli kapcsolatáról. A membránpotenciál változását az ioncsatorna S1-S4 alegységek által létrehozott feszültségszenzor doménje(VSD) érzékeli. Depolarizáció hatására a pozitív töltéseket hordozó S4 alegység elmozdul,e konformációváltozás pedig áttevődik a pórusformáló doménra (PD),így a csatorna aktivációs kapuja kinyit,megkezdődik a kálium ionok átáramlása. A VCF technika fontos információt szolgáltat a két domén közötti csatolásról,illetve az azt befolyásoló tényezőkről,mivel független jelek mérhetők a két doménről. Az ioncsatornába, pontosabban az S3-S4 szegmenseket összekötő hurokba mutagenezissel egy alfa-aminosavat,ciszteint helyeznek be majd a mutáns DNS-ről készített mRNS-t Xenopus laevis oocytákba injektálják,expresszáltatják, ezután reaktív fluorofórral inkubálják őket a feszültség zár fluorometriás kísérletek elvégzéséhez. Az cisztein aminosavat helyspecifikus mutagenezissel (QuikChange II Site-Direced Mutagenesis) hozzuk létre a megadott pozícióban. Ezzel a módszerrel gyorsan és hatékonyan tudunk mutációt létrehozni polimeráz láncreakció (PCR) segítségével. A mutációt tartalmazó DNS-t szuperkompetens baktériumokba transzformáljuk hősokkal; majd táptalajra való szélesztés után a felvett telepeket regenerálódni hagyjuk. A következő lépésben elvégezzük a miniprepalálást, mellyel kinyerjük a plazmid DNS-t további felhasználáshoz. Végül a DNS szekvenálás nyújt információt arról,hogy sikeresen megtörtént-e a cisztein mutáció.hu_HU
dc.description.correctorgj
dc.description.courseBiológia BSchu_HU
dc.description.degreeBSc/BAhu_HU
dc.format.extent39hu_HU
dc.identifier.urihttp://hdl.handle.net/2437/239877
dc.language.isohuhu_HU
dc.subjectioncsatornahu_HU
dc.subjectVCF
dc.subjectmutagenezis
dc.subject.dspaceDEENK Témalista::Biológiai tudományokhu_HU
dc.titleKv1.3 feszültségfüggő ioncsatornák cisztein mutánsainak létrehozásahu_HU
Fájlok
Gyűjtemények
Hallgatói dolgozatok (Természettudományi és Technológiai Kar)