A miozin foszfatáz lokalizációjának és kölcsönható fehérjéinek vizsgálata a sejtmagban

A tétel rövid nézete
dc.contributor.advisorLontay, Beáta
dc.contributor.authorDojcsák, Nikoletta
dc.contributor.departmentDE--TEK--Természettudományi és Technológiai Kar--Biológiai és Ökológiai Intézethu_HU
dc.date.accessioned2010-05-10T08:47:12Z
dc.date.available2010-05-10T08:47:12Z
dc.date.created2010-05-10
dc.date.issued2010-05-10T08:47:12Z
dc.description.abstractA miozin foszfatáz a Ser/Thr specifikus protein foszfatázok családjába tartozó enzim, melynek felépítésében a protein foszfatáz 1 katalitikus alegység (PP1c), a miozin kötő regulátor alegység (MYPT1), valamint egy 20 kDa alegység (M20) vesz részt. A miozin foszfatázt először izomszövetben jellemezték, szerepét az izomsejtek kontraktilis folyamatainak és más, miozinhoz kötött citoszkeletális változások szabályozásában ismerték fel. Ezen szabályozási folyamatok a miozin 20 kDa könnyűláncának (MLC20) defoszforilációján alapulnak. A miozin foszfatáz más sejtfolyamatokban betöltött szabályozó szerepe kevésbé ismert, de jelenlétét nem-izom szövetekben is kimutatták, ahol más citoszkeletális, de nem miozin szubsztrátok defoszforilációjáért felelős. A MYPT1 citoszolikus/citoszkeletális lokalizáció mellett a sejtmagban is jelen van, így patkány aorta simaizom sejtekben, de a sejtmagi és sejtmagvacskai lokalizációt más nem-izom sejtvonalakon is, így idegsejtekben is igazolták. Munkánk célja volt, hogy az enzim sejtmagi lokalizációjának meghatározásával és a miozin foszfatázzal kölcsönható fehérjék kimutatásával vizsgáljuk az enzim sejtmagon belüli lehetséges szabályozó funkcióit. A MYPT1 alegység jelenlétét humán hepatokarcinóma (HepG2) sejtek sejtmagi és szubnukleáris frakcióiban Western blot analízissel és P32-MLC20 szubsztráttal végzett miozin foszfatáz enzimaktivitás vizsgálattal, valamint immunfluoreszcenciás kísérletekkel is bizonyítottuk. Western blot analízissel kimutattuk a protein foszfatáz 1 katalitikus alegység izoformák közül a PP1cδ-t a sejtmagban. A MYPT1 alegység szubcelluláris lokalizációjának immunfluoreszcens vizsgálatával kimutattuk a szabályozó alegység jelenlétét a splicing faktor kompartmentekben. A miozin foszfatáz szabályozó alegység kölcsönhatását a kromatinnal kromatin immunprecipitációval bizonyítottuk, a vizsgálathoz anti-MYPT1-296 és anti-MYPT689-702 antitesteket használtunk. A potenciális MYPT1-kölcsönható fehérjék kimutatását immunprecipitációval végeztük. Eredményeink szerint a miozin foszfatáz MYPT1 regulátor alegysége jelen van a sejtmagban és ott feltehetően a splicing faktor kompartmentekben lokalizálódik, ami arra utal, hogy szerepe lehet az mRNS érés szabályozásában. A PP1cδ sejtmagi lokalizációjából arra következtethetünk, hogy a miozin foszfatáz a sejtmagban holoenzim formájában is jelen lehet. Igazoltuk azt is, hogy a MYPT1 közvetve vagy közvetlenül kötődik a DNS-hez. A MYPT1-gyel kölcsönható fehérjék vizsgálata során azonosítottunk három lehetséges kölcsönható fehérjét, amelyek a sejtmagban szerepet játszhatnak a miozin foszfatáz által szabályozott folyamatokban, szubsztrátjai lehetnek az enzimnek.hu_HU
dc.description.correctorgj
dc.description.courseMolekuláris biológushu_HU
dc.description.degreerégi képzéshu_HU
dc.format.extent32hu_HU
dc.identifier.urihttp://hdl.handle.net/2437/95958
dc.language.isohuhu_HU
dc.subjectmiozin-foszfatázhu_HU
dc.subjectMYPThu_HU
dc.subject.dspaceDEENK Témalista::Biológiai tudományokhu_HU
dc.titleA miozin foszfatáz lokalizációjának és kölcsönható fehérjéinek vizsgálata a sejtmagbanhu_HU
Fájlok
Gyűjtemények
Hallgatói dolgozatok (Természettudományi és Technológiai Kar)