A flotillin-1 fehérje, mint a protein foszfatáz 2A új kölcsönható partnerének vizsgálata

A tétel rövid nézete
dc.contributor.advisorBoratkó, Anita
dc.contributor.authorThalwieser, Zsófia
dc.contributor.departmentDE--Természettudományi és Technológiai Kar--Biológiai és Ökológiai Intézethu_HU
dc.date.accessioned2016-05-05T12:29:09Z
dc.date.available2016-05-05T12:29:09Z
dc.date.created2016-05-05
dc.description.abstractA szerin-treonin (Ser/Thr) specifikus foszfatázok csoportjába tartozó protein foszfatáz 2A (PP2A), szerkezeti felépítését tekintve három alegységből áll. Az A szerkezeti és a C katalitikus alegység dimerjéhez, egy harmadik úgynevezett B regulátor alegység (PP2A B) kapcsolódik. A különféle B alegységek a holoenzimek szubsztrátspecificitását és a sejten belüli lokalizációját határozzák meg. Munkacsoportunk korábban tüdő artéria endotél sejtekből végzett pull down kísérletből származó minta tömegspektrometriás analízisével, a flotillin-1 fehérjét, mint a rekombináns GST-PP2A Bα fehérje új kölcsönható partnereként azonosította. A flotillin fehérjék a sejtfelszíni receptorok és a citoszkeleton közötti kapcsolat létrehozásában, jelátviteli folyamatokban részt vevő membránfehérjék. Jelenlegi munkánk célja volt, a PP2A holoenzim és flotillin-1 fehérje kölcsönhatásának további vizsgálata, melyhez az alábbi kísérleteket terveztük elvégezni. Tüdő artéria endotél sejtekből készített cDNS felhasználásával a flotillin-1 szekvenciájának felsokszorosítása szubklónozásra alkalmas primerekkel, majd a pGEX-4T-2-flotillin-1 rekombináns plazmid létrehozása. A rekombináns GST-flotillin-1 termeltetésének optimalizálása eltérő IPTG koncentráció és hőmérséklet alkalmazásával. A tisztított GST-flotillin-1 és PP2A holoenzim közti kölcsönhatás vizsgálata pull down kísérletben endotél sejtek felhasználásával. Az endogén PP2A Bα és flotillin-1 kölcsönhatásának kimutatása immunprecipitáció elvégzésével és a kölcsönhatás sejten belüli lokalizációjának vizsgálata immunfluoreszcens kísérlettel. Eredményeink alapján elmondhatjuk, hogy sikeresen előállítottuk a pGEX-4T-2-flotillin-1 rekombináns plazmidot, optimalizáltuk a GST-flotillin-1 fehérje termeltetését. A tisztított GST-flotillin-1 fehérje képes volt a PP2A holoenzim A, C és Bα alegységét pull down kísérletben megkötni. Az endogén fehérjék közötti kölcsönhatást immunprecipitációs és immunfluoreszcens kísérletekkel igazoltuk. A továbbiakban szeretnénk a PP2A Bα és flotillin-1 fehérjéket specifikus siRNS-ek felhasználásával depletálni az endotél sejtekben és a csendesítés hatását megvizsgálni.hu_HU
dc.description.correctorgj
dc.description.courseBiológiahu_HU
dc.description.degreeBSc/BAhu_HU
dc.format.extent41hu_HU
dc.identifier.urihttp://hdl.handle.net/2437/226505
dc.language.isohuhu_HU
dc.subjectfehérjehu_HU
dc.subjectfehérje kölcsönhatás
dc.subjectendotél sejt
dc.subjectwestern blot
dc.subjectflotillin
dc.subjectprotein foszfatáz 2A
dc.subject.dspaceDEENK Témalista::Biológiai tudományokhu_HU
dc.titleA flotillin-1 fehérje, mint a protein foszfatáz 2A új kölcsönható partnerének vizsgálatahu_HU
Fájlok
Gyűjtemények
Hallgatói dolgozatok (Természettudományi és Technológiai Kar)