A Drp1 mitokondriális hasadásért felelős fehérje hatása neuroblasztóma sejtek "in vitro" neurális differenciációjára - globális transzkripciós változások "in silico" analízise.

Dátum
Folyóirat címe
Folyóirat ISSN
Kötet címe (évfolyam száma)
Kiadó
Absztrakt

A mitokondriumok dinamikus organellumok, amelyek folyamatos fúzión és hasadáson mennek keresztül. Az olyan neurodegeneratív betegségekre, mint például a Huntington kór gyakran jellemző a mitokondriális dinamika felborulása. A Huntington betegségben számos mitokondriális fúzióért és hasadásért felelős fehérje diszregulációját leírták már, például a Drp1 (dynamin-related protein 1), Fis1 (mitochondrial fission 1 protein), Mfn1 (mitofusin 1), Mfn2 (mitofusin 2), OPA1 (optic atrophy protein 1). A laboratóriumban elvégzett kísérlet során a fúziós és a hasadási folyamatban szerepet játszó mitokondriális gének expressziójának változását vizsgáltam egy Drp1-et stabilan csendesített és egy kontroll sejtvonalban. A kísérlethez nem differenciált sejteket használtam és a mitokondriális géneket qPCR-el vizsgáltam. Összesen 8 mitokondriális gént vizsgáltam meg, ezek a következők voltak: OPA1, Mff, MFN2, MFN1, FIS1, MDIV49, MDIV51, DNM1L. Az Mff kivételével ezen gének közül egyik expressziójában sem figyeltem meg változást a Drp1 csendesítés hatására. Az előzetes eredmények arra utalnak, hogy az Mff downregulált, viszont ennek megerősítésére további vizsgálatok szükségesek. Az in silico vizsgálat során nem differenciált, Drp1 csendesített és kontroll sejtvonalon készült RNS szekvenálás eredményét elemeztem. Később a munkacsoport a sejteket retinsavval és BDNF-el (Brain-Derived Neurotrophic Factor) differenciáltatta. A neurális differenciálás első és hatodik napján qPCR-el a következő gének expressziójában bekövetkező változásokat vizsgálták: BANK1, DUSP2, ISLR2, HES7, DEPTOR, ROBO2, DUSP9, INSM1, DRD2, MYCL, GDF-10, NEUROG-2, VEGFA. Az eredmények arra mutattak, hogy a DEPTOR, az ISLR2 és a BANK1 expressziójában szignifikáns változás történt a neurális differenciáció során a Drp1 csendesítés hatására összehasonlítva a differenciált kontrollal. Következtetésként elmondhatjuk, hogy a Drp1 stabil csendesítése a mitokondriális morfológia megváltozását eredményezi. A mitokondrium a Drp1 csendesített sejtek neurális differenciációja során nem rendeződik át és a vizsgált gének expressziója sem mutat szignifikáns eltérést. Ugyanakkor a differenciáció során bizonyos gének expressziója szignifikánsan megváltozik a differenciált kontroll sejtekhez képest.

Leírás
Kulcsszavak
Drp1, mitokondrium, neuroblasztóma, neurális differenciáció, qPCR
Forrás