A Schizosaccharomyces pombe Sep15 fehérjéjének C-terminálisának HA jelölése

Abstract

Célunk a Sch. pombe Sep15 fehérje C-terminálisának hemaglutinin jelölése. A kísérletünket a 192-es (pFA6a-3HA-kanMX6) plazmid izolálásával kezdtük, amit a következő PCR-ben templátként használtunk. Az izolálásunk sikeresnek bizonyult. PCR-val folytattuk munkánkat a sep15HA forward és reverse primerek alkalmazásával és templátként a 192-es plazmidot használtuk. A gélelektroforézis alapján megállapítottuk, hogy a felszaporított termék méret megegyezik a vártnak ( ̴ 2000 bp). Elvégeztük a transzformálást elektroporátorral a sep15HA PCR termék segítségével, majd geneticines táptalajon tenyésztettük a sejteket, de a kontrollon is nőttek telepek az első esetben, amikor a geneticin törzsoldat koncentrációja 100 mg/ml volt. Második esetben a geneticin koncentrációját másfélszeresre növeltük és a kontrollon ebben az esetben nem nőttek telepek. A colony PCR során sep15HaellF és kxtest primereket használtunk és gélelektroforézissel ellenőriztük a kapott eredményt, ami során azt tapasztaltuk, hogy az integráció nem következett be. A termékünknek 1670 bp méretűnek kellett volna lennie, de mi egy ̴ 300 bp körüli terméket kaptunk. Második esetben is azonos módon jártunk el, ebben az esetben viszont túl sok aspecifikus terméket kaptunk. Tehát az integráció nem következett be.