Az intracelluláris kalcium transzport fehérjék, mint például a rianodin receptor (RYR) konvencionális elektrofiziológiai módszerekkel elhelyezkedésük miatt nem tanulmányozhatók. Ezért azok csak szövetekből történő izolálás után vizsgálhatók. Feladatom egy szívizomszövetet használó izolálási protokollnak az optimalizálása volt, ami magában foglalta a RYR- t és SERCA- t tartalmazó vezikulumok preparatív biokémiai eljárásokkal történő szeparálását és az ezt követő biokémiai- és funkcionális vizsgálatukat. Kísérleteim során a következő lépéseket végeztem el:

1. A homogenizált myokardiális szövetből a mikroszóma frakciót differenciál centrifugálással izoláltam, majd azt összetevőire szeparáltam. A centrifugálási lépések paramétereit úgy állítottam be, hogy a SERCA és RYR hozama, minősége megfelelő legyen.
2. A preparátum fehérje koncentrációját Lowry módszerrel, spektrofotométeren határoztam meg.
3. Az egyes lépések során keletkezett felülúszók és pelletek SERCA pumpa és RYR tartalmát SDS gélelektroforézissel, kalcium felszabadulás mérésekkel és radioligand kötési módszerrel ellenőriztem. Vizsgálataim során patkányból származó izolált kardiális SR vezikulákat alkalmaztam, melyekben kalcium csatornák és kalcium pumpák egyaránt találhatóak. A kalcium felszabadulást vizsgáló kísérleteket egy kalcium érzékeny metallokróm festékkel, antipirilazo III- mal (APIII) végeztem Spex Fluoromax spektrofoto-fluoriméteren. A kapott mérési görbék alapján követhető volt a kalcium felszabadulás folyamata. A SERCA pumpa ATP hidroxiláz aktivitását egy NADH fogyáson alapuló fotometriás eljárással 340 nm- en, Beckmann spektrofotométeren határoztam meg.
4. Ellenőriztem a preparátumban található Ca2+ csatornák működését és a munkacsoport által a későbbiekben tervezett single channel árammérések kivitelezhetőségét. A kísérleteim eredményei alapján arra a következtetésre jutottam, hogy sikerült kardiális SR vezikulákat izolálni patkányszívből, és a biokémiai funkció vizsgálatok alapján a karakterizált RYR2 megfelelő minőségben és mennyiségben találhatóak a preparátumokban.