Intracelluláris kalcium transzportfehérjék izolálásának optimalizálása szívizomból

A tétel rövid nézete
dc.contributor.advisorJóna, István
dc.contributor.advisordeptDebreceni Egyetem::Általános Orvostudományi Kar::Élettani Intézethu_HU
dc.contributor.authorKulin, Flóra
dc.contributor.departmentDE--Általános Orvostudományi Karhu_HU
dc.contributor.opponentLukács, Balázs
dc.contributor.opponentdeptDebreceni Egyetem::Népegészségügyi Kar::Fizioterápiás Tanszékhu_HU
dc.date.accessioned2015-06-22T13:15:09Z
dc.date.available2015-06-22T13:15:09Z
dc.date.created2015
dc.description.abstractAz intracelluláris kalcium transzport fehérjék, mint például a rianodin receptor (RYR) konvencionális elektrofiziológiai módszerekkel elhelyezkedésük miatt nem tanulmányozhatók. Ezért azok csak szövetekből történő izolálás után vizsgálhatók. Feladatom egy szívizomszövetet használó izolálási protokollnak az optimalizálása volt, ami magában foglalta a RYR- t és SERCA- t tartalmazó vezikulumok preparatív biokémiai eljárásokkal történő szeparálását és az ezt követő biokémiai- és funkcionális vizsgálatukat. Kísérleteim során a következő lépéseket végeztem el: 1. A homogenizált myokardiális szövetből a mikroszóma frakciót differenciál centrifugálással izoláltam, majd azt összetevőire szeparáltam. A centrifugálási lépések paramétereit úgy állítottam be, hogy a SERCA és RYR hozama, minősége megfelelő legyen. 2. A preparátum fehérje koncentrációját Lowry módszerrel, spektrofotométeren határoztam meg. 3. Az egyes lépések során keletkezett felülúszók és pelletek SERCA pumpa és RYR tartalmát SDS gélelektroforézissel, kalcium felszabadulás mérésekkel és radioligand kötési módszerrel ellenőriztem. Vizsgálataim során patkányból származó izolált kardiális SR vezikulákat alkalmaztam, melyekben kalcium csatornák és kalcium pumpák egyaránt találhatóak. A kalcium felszabadulást vizsgáló kísérleteket egy kalcium érzékeny metallokróm festékkel, antipirilazo III- mal (APIII) végeztem Spex Fluoromax spektrofoto-fluoriméteren. A kapott mérési görbék alapján követhető volt a kalcium felszabadulás folyamata. A SERCA pumpa ATP hidroxiláz aktivitását egy NADH fogyáson alapuló fotometriás eljárással 340 nm- en, Beckmann spektrofotométeren határoztam meg. 4. Ellenőriztem a preparátumban található Ca2+ csatornák működését és a munkacsoport által a későbbiekben tervezett single channel árammérések kivitelezhetőségét. A kísérleteim eredményei alapján arra a következtetésre jutottam, hogy sikerült kardiális SR vezikulákat izolálni patkányszívből, és a biokémiai funkció vizsgálatok alapján a karakterizált RYR2 megfelelő minőségben és mennyiségben találhatóak a preparátumokban.hu_HU
dc.description.courseorvosi laboratóriumi és képalkotó diagnosztikai analitikushu_HU
dc.description.courseactnappalihu_HU
dc.description.courselangmagyarhu_HU
dc.description.coursespecOrvosdiagnosztikai laboratóriumi analitikahu_HU
dc.description.degreeBSc/BAhu_HU
dc.format.extent44hu_HU
dc.identifier.urihttp://hdl.handle.net/2437/214577
dc.language.isohuhu_HU
dc.rightsNevezd meg! - Ne add el! - Ne változtasd! 2.5 Magyarország*
dc.rights.urihttp://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/2.5/hu/*
dc.subjectRianodin receptorhu_HU
dc.subjectRyr2hu_HU
dc.subjectSingle channel áramméréshu_HU
dc.subjectSERCA pumpahu_HU
dc.subject.dspaceDEENK Témalista::Orvostudomány::Élettanhu_HU
dc.titleIntracelluláris kalcium transzportfehérjék izolálásának optimalizálása szívizombólhu_HU
Fájlok
Gyűjtemények
Hallgatói dolgozatok (Általános Orvostudományi Kar)