Antitrombin és heparin származékok kölcsönhatásainak vizsgálata felszíni plazmon rezonanciával

A tétel rövid nézete
dc.contributor.advisorPénzes-Daku, Krisztina
dc.contributor.advisordepttanársegédhu_HU
dc.contributor.authorPapp, Kinga
dc.contributor.departmentDE--Általános Orvostudományi Karhu_HU
dc.contributor.opponentKun, Mária
dc.contributor.opponentdeptÁltalános Orvostudományi Kar::Sebészeti Műtéttani Tanszékhu_HU
dc.date.accessioned2018-07-09T08:14:25Z
dc.date.available2018-07-09T08:14:25Z
dc.date.created2018-05-17
dc.description.abstractBevezetés: Az antitrombin (AT) egy 58 kDa molekulatömegű glikoprotein. Ez egy olyan fehérje, mely szerepet játszik a véralvadási folyamatok szabályozásában. Progresszív szerin proteáz enzim inhibitor, mely képes kötődni a FVIIa kivételével az összes aktív szerin proteáz véralvadási faktorhoz és inaktiválni azokat. Az AT 1:1 arányú komplexet képez a gátolt proteázzal, az enzim inaktivitása azonban nagyon lassú. Képes kötődni azonban speciális pentaszacharid egységet tartalmazó negatív töltésű glükózaminoglikánokhoz, mint pl. a heparin. A heparán szulfát képes gyorsítani a gátlást azáltal, hogy kötődése az AT-hoz konformáció változást indukál az AT reakció centrumában. Ez elősegíti az enzimekkel való kölcsönhatását. A nagy affinitású heparin-AT kötődés kinetikáját eddig még felszíni plazmon rezonanciával nem vizsgálták részletesebben. Célkitűzés: humán plazmából nyert vad típusú AT és heparin származékok kölcsönhatásának vizsgálata izotermális titrációs kalorimetria (ITC) és surface plasmon resonance (SPR) módszerekkel. Anyagok és módszerek: méréseinkhez Biacore X és Microcal 200 típusú készülékeket használtunk. Karboximetil-dextránnal (CM), illetve streptavidinnel (SA) fedett szenzor chipekre ligandként immobilizáltuk a humán plazmából izolált AT-t módosítás nélkül vagy biotinnal konjugálva. Analitként gyárilag előállított heparin származékokat használtunk megadott koncentrációkban. Kontroll cellára bovine serum albumin-t (BSA) immobilizáltunk, SA chip esetén biotinnal fedtük le a kontrollfelszínt. 2 illetve 10 µL/perces áramlási sebességet alkalmazva áramoltattuk az analitként használt heparin származékokat. Eredmények Idraparinux és Clexane különböző koncentrációt alkalmaztuk µM-os tartományban. 50 µM Idraparinux oldat 10 µL/perces áramlási sebességénél a egyensúlyi diszszociációs állandó (KD) 2.6x10-5, míg ugyanezen koncentrációjú Idraparinux oldat 2 µL/perces áramlási sebességénél 1.66x10-5 M-nak adódott a KD. Konklúzió: Egyetlen szenzorgramból származó adatok nem szolgáltatnak elég bizonyítékot és adatokat a kötődés jellemzésére, de a különböző áramlási sebességekkel kapott, az AT és IP kölcsönhatását jellemző KD értékek között igen csekély a különbség: 2.6x10-5 M és 1.66x10-5 M. Ugyan ezek az értékek egy-egy szenzorgram elemzéséből származnak, viszont két különböző chipen történt mérések eredményei, így feltételezhetjük, hogy a vizsgált kölcsönhatás KD értéke a 10-5 M tartományban van.hu_HU
dc.description.correctorLB
dc.description.courseáltalános orvostudományihu_HU
dc.description.courseactnappalihu_HU
dc.description.courselangmagyarhu_HU
dc.description.coursespecorvosi laboratóriumi és képalkotó diagnosztikai analitikushu_HU
dc.description.degreeBSc/BAhu_HU
dc.format.extent55hu_HU
dc.identifier.urihttp://hdl.handle.net/2437/255424
dc.language.isohuhu_HU
dc.subjectplazmon rezonanciahu_HU
dc.subjectantitrombin
dc.subjectheparin
dc.subjectidraparinux
dc.subjectvéralvadás
dc.subjecttrombózis
dc.subject.dspaceDEENK Témalista::Orvostudományhu_HU
dc.titleAntitrombin és heparin származékok kölcsönhatásainak vizsgálata felszíni plazmon rezonanciávalhu_HU
Fájlok
Gyűjtemények
Hallgatói dolgozatok (Általános Orvostudományi Kar)