Differenciációs útvonalak megfordíthatósága
dc.contributor.advisor | Nagy, László | |
dc.contributor.advisor | Simándi, Zoltán | |
dc.contributor.author | Kajdi, Róbert | |
dc.contributor.department | DE--TEK--Természettudományi és Technológiai Kar--Biológiai és Ökológiai Intézet | hu_HU |
dc.date.accessioned | 2010-05-10T08:33:01Z | |
dc.date.available | 2010-05-10T08:33:01Z | |
dc.date.created | 2010-05-10 | |
dc.date.issued | 2010-05-10T08:33:01Z | |
dc.description.abstract | A fejlődésbiológia hosszú időn át megválaszolatlan kérdése volt, hogy egy adott irányba elkötelezett sejt vajon elveszti-e azon képességét, hogy más típusú sejtekké alakuljon. Gurdon 1950-es évek végén végzett béka-kísérletei rámutattak arra, hogy a még terminálisan differenciálódott sejtek is rendelkeznek mindazon információval, amely egy új egyed létrehozásához szükséges. Az elmúlt években ismertté vált, hogy a sejtek sorsának alapvető meghatározó elemei a transzkripciós faktorok, melyek célgénjeik transzkripciójának szabályozásán keresztül befolyásolni képesek azokat. Megfigyelték, hogy bizonyos transzkripciós faktorok expressziójának befolyásolásával egy sejt képes lehet a transzdifferenciációra, vagyis egy adott irányba elkötelezett sejtből egy másik irányba elköteleződött sejt létrehozására. Az alapkutatás és a jövőbeni terápiás célú alkalmazás szempontjából 2006-ban a Yamanaka munkacsoport eredményei jelentős áttörést hoztak, akik már egy differenciálódott sejttípusba (embrionális és felnőtt egérből származó fibroblaszt sejtek) négy meghatározott transzkripciós faktor visszajuttatásával (Oct3/4; Sox2; Klf4; c-Myc) embrionális őssejt morfológiájú sejtkolóniákat hoztak létre. Ezek a sejtek epigenetikai, génkifejeződési és funkcionális vizsgálatokkal igazoltan is egyeztek az embrionális őssejtek tulajdonságaival, ezért indukált pluripotens őssejteknek (iPS) nevezték el őket. Később számos kutatócsoport hozott létre egér és humán iPS-t más és más génbeviteli eljárásokkal, próbálva csökkenteni a genetikai beavatkozás mértékét. A terápiás célú alkalmazásokhoz elengedhetetlen, hogy visszafordítható genommódosítás segítségével hozzunk létre iPS-t. Kísérleteimben egy, az erre a célra potenciálisan alkalmas, transzpozon alapú rendszert teszteltem és jellemeztem. Egér embrionális fibroblasztok izolálását követően a Sleeping Beauty transzpozon rendszer segítségével, transzfekcióval vittem be a sejtekbe a transzkripciós faktorokat. Már 5-6 nap után morfológiai változások jöttek létre. A transzfekciót követően 10-12 nap múlva embrionális őssejtekhez hasonló morfológiát vettek fel a kolóniák. Ekkor történt meg a kolóniakiválasztás és felvétel, majd a dajkasejtrétegre (mitomycin C-vel osztódásában gátolt SNL immortalizált fibroblaszt sejtek) helyezés. Jellemzésük részeként vizsgáltam a kolóniákat őssejtekre jellemző génekre. Az indukált pluripotens őssejtek mRNS (Nanog, Oct3/4) és fehérje szinten is (SSEA-1, Oct3/4, alkalikus foszfatáz aktivitás) hasonló értékeket mutattak az R1 embrionális egér őssejtvonalban mértekkel. Eredményeink azt mutatják, hogy a transzpozon szakasz, transzpozáz enzim általi későbbi kivágásával, ez a rendszer alkalmas lehet a genommódosítást nélkülöző őssejt terápiák megalapítására. | hu_HU |
dc.description.corrector | gj | |
dc.description.course | Molekuláris biológus | hu_HU |
dc.description.degree | régi képzés | hu_HU |
dc.format.extent | 46 | hu_HU |
dc.identifier.uri | http://hdl.handle.net/2437/95949 | |
dc.language.iso | hu | hu_HU |
dc.subject | indukált pluripotens őssejtek | hu_HU |
dc.subject | transzpozon | hu_HU |
dc.subject.dspace | DEENK Témalista::Biológiai tudományok::Molekuláris biológia | hu_HU |
dc.subject.dspace | DEENK Témalista::Biológiai tudományok::Biokémia | hu_HU |
dc.title | Differenciációs útvonalak megfordíthatósága | hu_HU |
dc.title.subtitle | Egér embrionális fibroblaszt eredetű indukált pluripotens őssejtek előállítása és karakterizálása | hu_HU |
dc.title.translated | Reversibility of differentiating pathways: Generation and characterization of induced pluripotent stem cells derived from mouse embryonic fibroblasts | hu_HU |