A növényi foszfoprotein foszfatázok működésének vizsgálata

Dátum
2012-05-02T12:41:51Z
Folyóirat címe
Folyóirat ISSN
Kötet címe (évfolyam száma)
Kiadó
Absztrakt

A protein foszfatáz 1 (PP1) fontos szerepet tölt be az állatok sejtciklusának szabályozásában, többek között a retinoblasztóma fehérjéket is defoszforilálja. Az Orvosi Vegytani Intézet és az MTA Szegedi Biológiai Központ együttműködésében végzett kísérletek előzetes eredményei szerint a rizs PP1 az egyszikűek sejtciklusának is fontos regulátora, defoszforilálja a retinoblasztóma-szerű fehérjéket. A növényi PP1 szubsztrátjainak azonosításához a rizs PP1 elleni antitestet kívánunk előállítani. Ebből a célból baktériumban termeltettünk rizs PP1 katalitikus alegységet. A rizsben található PP1 katalitikus alegységet kódoló Os01g0349400 gén cDNS-ét pET28a(+) plazmidba ligálva előállítottunk egy hexahisztidin-fúziós fehérje termeltetésére alkalmas bakteriális vektort. A vektor segítségével E. coli BLR sejtekben rekombináns fehérjét termeltettünk, amelynek SDS-PAGE segítségével meghatározott molekulatömege jól egyezett a számított molekulatömeggel, és a fúziós peptidszakaszra specifikus antitest segítségével Western blottal detektálható volt. Végezetül a termeltetett hexahisztidin-fúziós fehérjét nikkel-agaróz kromatográfiával csaknem homogén formában nyertük ki. Az eljárással antitest termeltetésére alkalmas, könnyen tisztítható rekombináns rizs PP1c-t tudunk előállítani.

Leírás
Kulcsszavak
foszfatázok, PP1, protein foszfatáz
Forrás