A miozin 20 kDa könnyűláncának (MLC20) foszforilációja fontos szerepet játszik a simaizom és nem-izom sejtek kontraktilis folyamatainak szabályozásában. A miozin foszforilációjának mértéke a miozin kináz(ok) és a miozin foszfatáz aktivitásának viszonyát tükrözi, amely a sejtet ért fiziológiai hatásokra az átalakító enzimek aktivitásának szabályozásával változhat. A miozin foszfatázt a protein foszfatáz 1 katalitikus alegység (PP1c) és a PP1c-hez és a miozinhoz egyaránt kötődő 130/133 kDa regulátor alegység (MYPT1) alkotja. A miozin foszfatáz aktivitása a MYPT1 Rho-kináz által Thr695 oldalláncon történő foszforilációjával gátolható. Célunk új simaizom és trombocita miozin és MYPT1 kinázok azonosítása, valamint a miozin foszfatáz aktivitás szabályozásának tanulmányozása volt a MYPT1-et foszforiláló új kinázokkal. Eredményeink szerint a trombocita citoszkeleton Rho-kináztól eltérő protein kinázokat tartalmaz, amelyek a MYPT1-et a Thr695 oldalláncon foszforilálják és ezzel a miozin foszfatáz gátlását okozzák. A trombocita citoszkeleton MYPT1 kináz, gélben végzett kináz reakció alapján, ~54-59 kDa fehérjének felel meg. Trombocita citoszkeleton és membrán frakciókban Westren-blottal 52-54 kDa ZIP-kináz (zipper-interacting kinase) és az 59 kDa ILK (integrin-linked kinase) jelenlétét mutattuk ki. A citoszkeletális ZIP-kináz és ILK enzimeket elválasztottuk, majd részlegesen tisztítottuk. A ZIP-kináz főleg a MLC20-ot foszforilálta, a MYPT1 szubsztrát fehérjékkel alacsony aktivitást mutatott. Az ILK a miozint és a MYPT1-et (a Thr695 oldalláncon) egyaránt foszforilálta. Kimutattuk, hogy az ILK a zúzából tisztított miozin foszfatáz holoenzimmel asszociál és a preparátumban az ILK a MYPT1-et foszforilálja. Tisztított ILK enzimmel MYPT1-et és MYPT1 mutánsokat (N- és C-terminális peptidszakaszokat) foszforiláltunk, amelyekben a Thr495, a Thr695 és a Thr709 foszforilált oldalláncokat azonosítottuk. A foszforilált MYPT1 PP1c aktivitást gátló hatása a Thr695 oldallánc foszforilációjának mértékével volt arányos. Eredményeink arra utalnak, hogy az ILK a trombocita citoszkeletonban részt vehet a miozin foszfatáz szabályozásában, ami a RhoA/Rho-kináz jelátvitel útvonal mellet meglévő új mechanizmus létezését igazolja. Az ILK a miozin foszfatáz holoenzimmel asszociál és foszforilálja a miozint és a MYPT1-et is, így szerepe lehet a sejtek citoszkeletális változásait kísérő folyamatok szabályozásában.