CRISPR CAS9 alapú genomszerkesztő technológiák alkalmazása a sejtvonal fejlesztésben

Dátum
Folyóirat címe
Folyóirat ISSN
Kötet címe (évfolyam száma)
Kiadó
Absztrakt

A diplomamunkámba a CRISPR Cas9 alapú genomszerkesztő technológiák alkalmazását mutattam be a sejtvonal fejlesztés területén közben egy kevés betekintést nyújtottam a sejttenyészet, plazmid klónozás, izolálás, transzformálás, transzfektálás, illetve a különböző PCR technikákba. A kutatócsoportunk célja a CRISPR-CAS9 technológia beállítása 3T3-L1 modell sejtvonal esetében, a VEGFa gén CTCF régiójában célzott genom szintű módosítások végrehajtására volt. Hosszútávú célunk volt, hogy a rendszert hatékonyan tudjuk működtetni, amihez egy egér eredetű, immortalizát, fibroblaszt sejtvonalat a 3T3- L1-et választottuk. A vizsgálathoz először is nélkülözhetetlen volt 3T3-L1 sejteket növeszteni, illetve ezeket a sejtvonalakat fenntartani. Célunk volt a guide RNS klónozása a célplazmidba, annak hatékony transzfektálása és a genom szintű változások kimutatása. A munkánk során kijelenthettük, hogy sikeresen klónoztuk az sgRNS-eket a célplazmidokba, amelynek termelését és tisztítását is sikeresen véghezvittük. Összességében elmondható, hogy a CRISPR rendszer gyors és hatékony működéséhez is feltétlen szükséges a megfelelő optimalizálás, ami a világszerte gyorsan gyarapodó cikkek és tapasztalatok alapján egyre könnyebben megoldható lesz

Leírás
Kulcsszavak
genomszerkesztés, CRISPR Cas9
Forrás