A glükóz-6-foszfát dehidrogenáz enzimaktivitás meghatározás bevezetése Magyarországon

Dátum
Folyóirat címe
Folyóirat ISSN
Kötet címe (évfolyam száma)
Kiadó
Absztrakt

A glükóz-6-foszfát-dehidrogenáz (G-6-PDH) enzim a pentóz-foszfát-útvonal első reakciólépését katalizálja, NADPH keletkezik, mely a vörösvértestekben igen fontos. A G-6-PDH hiány világszerte gyakori, több mint 400 millió embert érint, X-hez kötötten öröklődő enzimdefektus, amelyben a hemolitikus anaemia bizonyos gyógyszerek (pl. antibiotikumok) vagy oxidatív stressz (pl. fava bab fogyasztása) hatására súlyosbodhat. A módszer bevezetéséhez a Trinity Biotech reagenskészletét használtukm amely eljárásnál a NADP-t a G-6-PDH redukálja glükóz-6-foszfát jelenlétében és a NADPH képződésének a sebessége arányos a G-6-PDH aktivitásával. A módszerbevezetés alatt stabilitás vizsgálatot is végeztünk, amely esetében a teljes vérmintákat 1 hétig hűtőben (2-8°C) való tárolást követően újra lemértük az enzim aktivitását. A módszerbevezetés során megvizsgáltuk a leggyakoribb interferenciákat, melyeket In vitro körülmények között elemeztük, mint a hemolízis, az icterus és a lipémiás állapotot, amely során a teljes vérmintákat lizáltuk vagy ’spike’-oltuk különböző anyagokkal. Mindemellett megvizsgáltuk az anaemia, az emelkedett fehérvérsejtszám, thrombocyta és retikulocyta szám, valamint az életkor és a nem G-6-PDH aktivitásra gyakorolt zavaró hatását. Az eredményekről elmondható, hogy a stabilitás vizsgálat során a vörösvértest G-6-PDH 1 hétig stabil volt 2-8°C-on tárolva, de a vér fagyasztása nem javasolt, emellett jelentősen emelkedett fehérvérsejtszám (>50 G/L), thrombocyta szám (>550 G/L) és retikulocyta szám (>300 G/L), valamint lipémia (TG>70 mmol/L) esetén a G-6-PDH aktivitás fals emelkedését tapasztaltuk (P<0,05), azonban a hemolízis (akár 10%) és icterus (TBil<150 µmol/L-ig) nem zavarta a reakciót. A nemek szerinti felosztásnál nem észleltünk eltérést, míg az életkor szerinti csoportosításnál, a gyermekeknél megnövekedett enzimaktivitást észleltünk a felnőttekhez képest (132 ± 39 % vs. 103 ± 38 %, P = 0,025) a retikulocytosis miatt. A klinikusok által kért 24 klinikai mintából 2 mutatott csökkent G-6-PDH enzimaktivitást (<60%), ezért ezen két esetben (1 gyerek és 1 felnőtt) további vizsgálatok és genetikai ellenőrzés szükséges. A módszer bevezetés sikeres volt, alkalmas a G-6-PDH enzimaktivitás szűrésére, vizsgálatára. A G-6-PDH enzimaktivitás teszt kiegészíti a nem immun hemolitikus anaemia vizsgálatának diagnosztikai eszközeit.

Leírás
Kulcsszavak
glükóz-6-foszfát dehidrogenáz, G-6-PDH, G6PD gén, hemolitikus anaemia, interferencia, antimaláriás szerek, G6PD gén öröklődés, DNS izolálás, hemolízis, icterus, lipémia, Heinz testek, Bite cell, emelkedett sejtszám, perifériás vérkenet, Trinity Biotech, G-6-PDH referens tartomány, NADPH, sérülékeny vörösvértest
Forrás