SARS-CoV-2 specifikus T-sejtek aktivációjának kimutatására szolgáló módszerek összehasonlítása

A tétel rövid nézete
dc.contributor.advisorBácsi, Attila
dc.contributor.advisorTóth, Márta
dc.contributor.advisordeptDebreceni Egyetem::Általános Orvostudományi Kar::Immunológiai Intézethu_HU
dc.contributor.authorKántor, Dorina
dc.contributor.departmentDE--Általános Orvostudományi Karhu_HU
dc.contributor.opponentKovács, Renátó
dc.contributor.opponentdeptDebreceni Egyetem::Általános Orvostudományi Kar::Orvosi Mikrobiológiai Intézethu_HU
dc.date.accessioned2022-06-07T14:46:25Z
dc.date.available2022-06-07T14:46:25Z
dc.date.created2022
dc.description.abstractNapjainkra egyre több tanulmány támasztja alá, hogy a SARS-CoV-2 által okozott COVID-19 betegség leküzdésében/megelőzésében a celluláris immunitásnak is fontos szerepe van az ellenanyag termelés mellett. A vírusok eliminálásában szerepet játszó CD4+ és CD8+ T-sejtek aktivációjának egyik markere az interferon (IFN)-γ termelődése, amit különböző in vitro módszerekkel detektálhatunk. Munkánk során célul tűztük ki, hogy három különböző molekuláris biológiai módszerrel vizsgáljuk a SARS-CoV-2-specifikus T-sejtek IFNγ termelését. Kísérleteink során az alábbi módszereket alkalmaztuk: IFNγ release assay (IGRA), IFNγ ELISpot és áramlási citometrián alapuló SARS-CoV-2-specifikus T-sejt analízis. A teszteket heparinizált, friss vérből végeztük el, amelyekhez a vért két, különböző adenovírus vektor alapú vakcinát kapott donortól vettük le. Az IGRA teszt során a tüske fehérje S1 doménjéből származó antigénekkel fedett csövekbe mértük az 500 µl vért, amelyet 24 órás inkubáció követett 37°C-on. Ezután lecentrifugáltuk a csöveket és a felülúszóból ELISA módszer segítségével határoztuk meg a termelt IFNγ mennyiségét. Az IFNγ ELISpot során 3 ml vérből indultunk ki, amelyet Ficollra rétegeztünk és centrifugáltunk. Az így kapott mononukleáris sejteket ezután az ELISpot lemezre tettük és aktiváltuk őket a vírus tüske fehérjéjének S2 doménjéből származó peptidekkel (PepTivator). A lemezt 16 órán át inkubáltuk 37°C-on, majd előhívtuk. Az áramlási citometriás mérések során 1 ml teljes vérhez adtuk a PepTivatort. A sejteket 8 órán keresztül inkubáltuk 37°C-on. Ezután több lépéses sejtfelszíni és intracelluláris jelölés következett, majd a mérés. Mind a három módszer esetében pozitív és negatív kontrollokat is használtunk. Eredményeink szerint a három, általunk alkalmazott módszer képes az IFNγ termelés kimutatására. Az IGRA és az ELISpot módszer esetén össz-IFNγ termelést detektáltunk, míg az áramlási citometriás mérések során el tudtuk különíteni a CD4+ és CD8+ T-sejtekek által termelt citokineket. A módszerek elvégzéséhez kis mennyiségű vér elég volt, az eredmények 48 órán belül a rendelkezésünkre álltak.hu_HU
dc.description.correctorLB
dc.description.coursemolekuláris biológiahu_HU
dc.description.courseactnappalihu_HU
dc.description.courselangmagyarhu_HU
dc.description.coursespecImmunológia, sejt- és mikrobiológiahu_HU
dc.description.degreeMSc/MAhu_HU
dc.format.extent34hu_HU
dc.identifier.urihttp://hdl.handle.net/2437/334327
dc.language.isohuhu_HU
dc.rights.accessHozzáférhető a 2022 decemberi felsőoktatási törvénymódosítás értelmében.
dc.subjectSARS-CoV-2hu_HU
dc.subjectT-sejthu_HU
dc.subjectELISpothu_HU
dc.subjectIGRAhu_HU
dc.subjectinterferon-gammahu_HU
dc.subjectáramlási citometriahu_HU
dc.subjectkoronavírushu_HU
dc.subject.dspaceDEENK Témalista::Biológiai tudományok::Immunológiahu_HU
dc.subject.dspaceDEENK Témalista::Biológiai tudományok::Mikrobiológiahu_HU
dc.titleSARS-CoV-2 specifikus T-sejtek aktivációjának kimutatására szolgáló módszerek összehasonlításahu_HU
Fájlok
Gyűjtemények
Hallgatói dolgozatok (Általános Orvostudományi Kar)