A mitokondriális genomtopológia molekuláris vizsgálata
Fájlok
Dátum
Authors
Folyóirat címe
Folyóirat ISSN
Kötet címe (évfolyam száma)
Kiadó
DOI
Absztrakt
A diplomamunkám a mitokondriális genom topológiájának molekuláris vizsgálatával foglalkozik, különös tekintettel a TOP1MT (humán mitokondriális topoizomeráz I) fehérje vad típusának és R525W variánsának összehasonlító elemzésére. A TOP1MT kulcsszerepet tölt be a mitokondriális DNS (mtDNS) topológiájának szabályozásában, és egyedi nukleotid polimorfizmusai, mint az R525W variáns, potenciálisan befolyásolhatják a fehérje funkcióját és a mitokondriális folyamatokat. A kutatás során HCT 116 humán bélkarcinóma sejtvonalon végeztünk vizsgálatokat, amelyekben CRISPR/Cas9 módszerrel ki lett ütve a TOP1MT gén. A top1mt KO sejtekben tranziens transzfekcióval komplementáltuk a géndeléciót, sejtjeink vagy a TOP1MT vad típusát vagy az R525W variánst expresszálták tGFP-vel fúzionáltatva. A fehérjék diffúziós tulajdonságait és százalékos eloszlásukat fluoreszcencia korrelációs spektroszkópia (FCS) segítségével, míg mitokondriális lokalizációjukat konfokális lézerpásztázó mikroszkópiával (CLSM) és MitoTracker festéssel vizsgáltuk. Az eredmények statisztikai elemzése során összehasonlítottuk a vad típusú és a variáns (R525W) fehérje gyors és lassú komponenseinek diffúziós koefficienseit, valamint ezek százalékos eloszlását. Az FCS mérések három független kísérlet eredményei alapján nem mutattak szignifikáns különbséget a két fehérjeváltozat diffúziós koefficienseiben és százalékos eloszlásában. A kolokalizációs vizsgálatok igazolták, hogy mind a vad típusú, mind az R525W variáns TOP1MT fehérje a mitokondriumokban lokalizálódik. Eredményeink alapján az R525W variáns önmagában nem okoz jelentős eltérést a TOP1MT mobilitásában vagy lokalizációjában, azonban további vizsgálatok szükségesek a variáns funkcionális jelentőségének teljes körű feltárásához.