Fehérjemérnökséggel létrehozott beta-mannozil-transzferáz enzim jellemzése
| dc.contributor.advisor | Barna, Teréz | |
| dc.contributor.author | Papp, Annamária | |
| dc.contributor.department | DE--TEK--Természettudományi és Technológiai Kar--Biológiai és Ökológiai Intézet | hu_HU |
| dc.date.accessioned | 2009-12-07T13:02:42Z | |
| dc.date.available | 2009-12-07T13:02:42Z | |
| dc.date.created | 2009 | |
| dc.date.issued | 2009-12-07T13:02:42Z | |
| dc.description.abstract | A Thermobifida fusca gram-pozitív, komposzt- és talajlakó baktérium, amely széles spektrumú celluláz és hemicelluláz enzimrendszerrel rendelkezik. Ebből a glikozil hidrolázok 2-es csoportjába tartozó β-1,4-D-mannozidáz enzim célzott mutagenezisét tűztük ki célul, hogy kiiktassuk az enzim hidrolitikus aktivitását és egyúttal kialakítsuk ß-mannozil transzferáz aktivitást, amellyel lehetővé válik ß-mannozil származékok kemoenzimatikus szintézise. Az így előállított mannooligoszacharidok alkalmasak lehetnek patogén szervezetek sejt felszíni receptorainak felismerésére illetve blokkolására. A ß-mannozidos kötés elhasításában kulcs szerepet játszó nukleofil aminosavat azonosítottuk szerkezeti valamint aminosav szekvencia homológia alapján. Az 530-as helyzetű nukleofil Glu-t pontmutációval kicseréltük Ser-re és az így előállított β-1,4-D-mannozidáz mutáns enzimet biokémiailag jellemeztem. A mutáns enzimben valóban sikerült a ß-mannozidáz aktivitást megszüntetni és jelentős ß-mannozil transzferáz aktivitást elérni. A E530S ß-mannozidáz mutáns enzim szűk donor szubsztrátspecificitást, míg széles akceptor szubsztrátspecificitást mutat. A transzferáz aktivitást ß-mannopiranozid tartalmú akceptor és ß-D-mannopiranozilfluorid donor esetén optimalizáltam és 72%-os konverziót értem el. A keletkező termékek részletes szerkezetvizsgálatata feltárta, hogy a mutáns enzim egyedi ß-1,3-as mannozidos kötés kialakítására képes. A különböző akceptor molekulák tesztelése közben egy váratlan új hidrolítikus enzimaktivitást fedeztünk fel, amelynek révén a E530S ß-mannozidáz mutáns képes ß-glükuronidos kötés hasítására. A kapott eredmény azért is meglepő, mivel a vad típusú ß-mannozidáz nem rendelkezik ilyen aktivitással. A ß-glükuronidáz aktivitás kinetikai paraméterei azt mutatják, hogy az enzim jóval nagyobb affinitással bír a ß-glükuronil glikonhoz mint a vad típusú enzim a ß-mannopiranozil glikonhoz képest. | hu_HU |
| dc.description.corrector | gj | |
| dc.description.course | Biológus | hu_HU |
| dc.description.degree | régi képzés | hu_HU |
| dc.format.extent | 38 | hu_HU |
| dc.identifier.uri | http://hdl.handle.net/2437/90684 | |
| dc.language.iso | hu | hu_HU |
| dc.subject | fehérjemérnökség | hu_HU |
| dc.subject | beta-mannozil-transzferáz | hu_HU |
| dc.subject.dspace | DEENK Témalista::Biológiai tudományok::Biokémia | hu_HU |
| dc.subject.dspace | DEENK Témalista::Biológiai tudományok::Biotechnológia | hu_HU |
| dc.title | Fehérjemérnökséggel létrehozott beta-mannozil-transzferáz enzim jellemzése | hu_HU |