HER2 pozitív tumorok kombinált antitest terápiája

A tétel rövid nézete
dc.contributor.advisorVereb, György
dc.contributor.authorTóth, Gábor
dc.contributor.authorvariantTóth, Gábor
dc.contributor.departmentGyógyszertudományok doktori iskolahu
dc.contributor.submitterdepDE--Általános Orvostudományi Kar -- Biofizikai és Sejtbiológiai Intézet
dc.date.accessioned2018-09-07T10:16:17Z
dc.date.available2018-09-07T10:16:17Z
dc.date.created2018hu_HU
dc.date.defended2018-09-25
dc.description.abstractA HER2-ellenes célzott antitest kezelések témakörében a klinikumban alkalmazott trastuzumab és pertuzumab kombinációjának előnyét vizsgáltuk HER2-pozitív daganatokban, szem előtt tartva a trastuzumab rezisztencia jelenségét, mely HER2-pozitív emlőrákok esetén 50%-nál is gyakoribb. A kombináció hatékonyságát hatásmechanizmusának vizsgálatával támasztottuk alá. Az antitestek közvetlen biológiai (jelátviteli) és az ADCC-t kiváltó hatásai között az elkülönítést a trastuzumab és pertuzumab egész antitestek, valamint F(ab’)2 fragmentumaik összehasonlító vizsgálatával végeztük. Az in vitro ADCC vizsgálatokhoz nem-radioaktív kísérleti módszert kerestünk. Vizsgáltuk a FDA és a CFSE felszabadulás mérésén, a CFSE és propidium jodid jelölésen, valamint a kaszpáz aktiváció kimutatásán alapuló áramlási citometriás módszereket, valamint az impedancia alapú sejtanalizátor alkalmazhatóságát. A legnagyobb dinamikus tartományt és az antitest dózis-hatásfüggvényének kvantitálását ez utóbbi biztosította, így letapadó célsejtek esetén az impedancia alapú sejtanalizátor módszert, szuszpenzióban növő célsejtek esetén a kaszpáz aktiválódás áramlási citometriás meghatározását javasoljuk az ADCC radioaktivitás- mentes in vitro mérésére. A teljes trastuzumab és pertuzumab antitestekből kiindulva pepszin-agarózos emésztéssel az F(ab’)2 rész sérülése nélkül távolítottuk el az Fc fragmentumot. In vitro a teljes és F(ab’)2 antitest kezelések a JIMT-1 sejtek növekedését nem csökkentették, az ismerten trastuzumab-érzékeny BT-474 sejtvonalnál a két antitest kombinációja az egyedi kezeléseknél nagyobb, de additív proliferációgátló hatást eredményezett teljes antitestek és F(ab’)2 fragmentumok esetén is. In vivo az F(ab’)2 fragmentumok nem, a teljes antitestek egymáshoz hasonló mértékben csökkentették a JIMT-1 xenograft növekedését. A teljes antitestek kombinációja fokozottan gátolta a tumor növekedést, mely korrelált a xenograftok ex vivo immunfluoreszcenciás jelölésével kimutatható fokozott NK-sejt penetrációval. In vitro ADCC kísérletekben a két antitest kombinációja nem-szaturáló koncentrációknál additív volt. Ezek alapján feltehető, hogy a jelenleg klinikumban engedélyezett maximális antitest dózisok in vivo nem telítik az ADCC-t. Emiatt a daganat felfedezése után mihamarabb célszerű mindkét antitestet a klinikai kipróbálások során meghatározott maximális tolerálható dózisában, kombinálva alkamazni. Mivel a keringő tumorsejtek kifejezetten érzékenyek az ADCC-re, a kombinált antitest terápiát még a primer daganat rezisztenciája esetén is célszerű folytatni a metasztázisok kialakulásának gátlására.hu_HU
dc.description.abstractFocusing on anti-HER2 targeted antibody treatments, we examined the combination of trastuzumab and pertuzumab antibodies in the treatment of HER2-positive breast cancer. The phenomenon of trastuzumab resistance is of great importance due to its high, over 50% rate. In this work, we have demonstrated the superior efficacy of combination therapy and investigated its mechanism of action. To separately analyze antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity (ADCC) -based and direct biological effects of the antibodies, we performed comparative studies of the whole antibodies and its F(ab’)2 fragments. First, we aimed to find the most suitable nonradioactive method for quantitating in vitro ADCC against adherent cells. We compared FDA and CFSE release, propidium iodide uptake of the CFSE labeled cells, assays based on the detection of caspase activation in flow cytometry; and an impedance-based real-time cell adhesion test. The largest dynamic range and the quantitation of antibody dose-response were possible with the latter, and therefore used we recommend this technique as the best non-radioactive choice for ADCC of adherent target cells, However, we recommend flow cytometric detection of caspase activation in target cells that are in suspension. Next, we have produced intact functional F(ab’)2 fragments from both trastuzumab and pertuzumab by removing the Fc fragment using pepsin-agarose digestion. We have used these and the whole antibodies for in vitro and in vivo investigations. Neither the whole nor the F(ab’)2 antibodies decreased the proliferation of the in vitro trastuzumab-resistant JIMT-1 cells. The combination of both the whole or the F(ab’)2 antibodies showed an additive antiproliferative effect on the trastuzumab-sensitive BT-474 cells. The F(ab’)2 fragments did not decrease the growth of JIMT-1 xenografts in vivo, but the whole antibodies were equally efficient. Combination of the whole antibodies decreased the proliferation further, which effect correlated with the decreased penetration of NK cells into the tumor, showed by ex vivo immunofluorescent labeling. In vitro, the combination of the two antibodies showed additivityin ADCC, but only at non-saturating concentrations. Overall, we propose that the therapeutic antibody doses currently approved do not saturate ADCC in vivo. Thus it is advisable to use both antibodies at the maximal approved doses in combination as soon as possible after the diagnosis. As circulating tumor cells are pronouncedly sensitive to ADCC, combination therapy should be continued as metastasis prevention even when the primary tumor is resistant.hu_HU
dc.format.extent90hu_HU
dc.identifier.urihttp://hdl.handle.net/2437/256615
dc.language.isohuhu_HU
dc.language.isoenhu_HU
dc.subjectHER2hu_HU
dc.subjecttrastuzumabhu_HU
dc.subjectpertuzumabhu_HU
dc.subjecttrastuzumab-rezisztenciahu_HU
dc.subjectantitest-függő sejtes citotoxicitás (ADCC)hu_HU
dc.subjectkombinált antitest terápiahu_HU
dc.subjectnem radioaktív in vitro ADCC mérési módszerekhu_HU
dc.subjectimpedancia alapú sejtanalizátorhu_HU
dc.subjecttrastuzumab resistancehu_HU
dc.subjectAntibody-Dependent Cellular Cytotoxicity (ADCC)hu_HU
dc.subjectcombination antibody therapyhu_HU
dc.subjectnon-radioactive ADCC assayshu_HU
dc.subjectimpedance-based cell analyzerhu_HU
dc.subject.disciplineGyógyszertudományokhu
dc.subject.sciencefieldOrvostudományokhu
dc.titleHER2 pozitív tumorok kombinált antitest terápiájahu_HU
dc.title.translatedCombination antibody therapy of HER2 positive cancershu_HU
Fájlok
Eredeti köteg (ORIGINAL bundle)
Megjelenítve 1 - 4 (Összesen 4)
Nincs kép
Név:
DrToth_Gabor_tezis_magyar_titkositott.pdf
Méret:
606.66 KB
Formátum:
Adobe Portable Document Format
Leírás:
PhD tézisfüzet magyar nyelven
Letöltés
Nincs kép
Név:
DrToth_Gabor_tezis_angol_titkositott.pdf
Méret:
501.64 KB
Formátum:
Adobe Portable Document Format
Leírás:
PhD tézisfüzet angol nyelven
Letöltés
Nincs kép
Név:
MEGHIVO_PhD_vedes_Dr_Toth_Gabor.pdf
Méret:
90.3 KB
Formátum:
Adobe Portable Document Format
Leírás:
Meghívó PhD védésre
Letöltés
Nincs kép
Név:
DrToth_Gabor_doktori_ertekezes_titkositott2.pdf
Méret:
6.07 MB
Formátum:
Adobe Portable Document Format
Leírás:
értekezés
Letöltés
Engedélyek köteg
Megjelenítve 1 - 1 (Összesen 1)
Nincs kép
Név:
license.txt
Méret:
1.93 KB
Formátum:
Item-specific license agreed upon to submission
Leírás:
Letöltés
Gyűjtemények
Gyógyszerészeti Tudományok Doktori Iskola