A KCa3.1 ioncsatorna szerepe a CAR-T sejtek effektor funkciójában
Fájlok
Dátum
Szerzők
Folyóirat címe
Folyóirat ISSN
Kötet címe (évfolyam száma)
Kiadó
Absztrakt
A T-sejtek a limfociták igen nagy csoportját alkotják, melyek fontos szerepet játszanak az aktív immunitás kialakításában. Ezen sejtek legismertebb képviselői a CD4+ T-sejtek (helper/segítő T-sejtek) és CD8+ T-sejtek (citotoxikus/ölő T-sejtek). A T-sejtek csak fehérje alapú, receptorokhoz kötött antigéneket képesek felismerni. Ez az MHC/HLA I és II receptorok segítségével történik, melyhez hozzákötődnek a TCR-ek (T-sejt receptorok) és komplexet alkotva ismeri fel az adott antigént. Az antigén felismerés következtében elindul egy sejten belüli Ca2+-függő jelátvitel, melynek következtében a T-sejt aktiválódik; proliferálódik; citokin, interleukin 2 (IL2) és további citotoxikus molekula, mint például granzim B expresszálódik. A T-sejtek kálium ioncsatornái, mint amilyen a Ca2+-függő KCa3.1 kritikus szerepet játszik T- sejtek jelátvitelének és működésének szabályozásában azáltal, hogy biztosítják a hajtóerőt a megfelelő Ca2+ -függő jelátvitelhez. A genetikailag módosított T-sejtek az úgynevezett CAR-T sejtek, kiméra antigén receptorokkal (CAR) rendelkeznek. Ezeket a sejteket daganatellenes terápiáknál használják, hiszen az új, módosított receptorainak köszönhetően képes a tumorsejtek felszínén található specifikus antigént detektálni, hozzákapcsolódni és elpusztítani a tumorsejtet. A munkám során a Ca2+-aktivált, KCa3.1 kálium csatorna CAR-T sejtek effektor funkciójában betöltött szerepét tanulmányoztam. Retrovirális transzdukció segítségével sGFP konjugált, harmadik generációs, CD19-specifikus CAR-t és mCherry (monomer piros fluoreszcens fehérje) konjugált KCa3.1 ioncsatornát expresszáltattunk KCa3.1-deficiens Jurkat limfocita sejtvonalban, majd a transzdukció hatékonyságát áramlási citométerrel határoztuk meg. Direkt immunofluoreszcens jelölést végeztünk a CD19 sejtfelszíni marker expressziójának validálása céljából. Végezetül Live-or-Dye alapú killing-assay-t végeztünk TRAM34, KCa3.1 ioncsatorna gátlószer jelenlétében, amely segítségével meghatározhattuk a KCa3.1 ioncsatornák szerepét a CAR-T sejtek antitumorális válaszában. Sikeresen igazoltunk, hogy az általunk létrehozott mCherry-KCa3.1+ Jurkat CAR sejtek specifikusan felismerték és eliminálták célsejteket. Továbbá a KCa3.1 ioncsatorna gátlása szignifikánsan növelte az általunk létrehozott sejtek specifikus ölési hatékonyságát.