A SEPTIN7 géncsendesítés hatásai a melanóma sejtek működésére
Fájlok
Dátum
Szerzők
Folyóirat címe
Folyóirat ISSN
Kötet címe (évfolyam száma)
Kiadó
Absztrakt
A melanóma sejtek osztódásában, illetve migrációjában a raktár-vezérelt Ca2+ beáramlás (SOCE) kiemelt szereppel bír. A folyamatért elsősorban két fehérje (a Ca2+-szenzor STIM1 és a plazmamembrán ioncsatorna ORAI1) összekapcsolódása révén kialakult komplex felelős. Ezen komplexek, illetve a SOCE létrejöttéhez a hetero-oligomereket létrehozni képes, citoszkeletális septinek gyors átrendeződő képessége szükséges. Korábbi kísérleteink igazolták, hogy a septin filamentumok dinamikájának farmakológiai gátlása a melanóma sejtek migrációs képességét csökkenti. Jelen munkánk célja a septin struktúrák elengedhetetlen részeként szolgáló SEPTIN7 géncsendesítése okozta hatások vizsgálata volt. Kísérleteinkhez in situ (WM35), valamint metasztatikus melanómából (A2058) izolált sejtvonalakat alkalmaztunk. A SEPTIN7 gént tranziens transzfekcióval csendesítettük, amelynek sikerességét a SEPTIN7 mRNS, illetve fehérje expressziójának szignifikáns csökkenése mindkét sejtvonalon igazolta. Az intracelluláris Ca2+-koncentráció változásainak vizsgálatai igazolták, hogy az siRNS-sel csendesített sejtekben a SOCE amplitúdója és meredeksége egyaránt szignifikánsan csökkent. A géncsendesítés sejtosztódásra és sejtmigrációra gyakorolt hatásait CyQuant proliferációs, Boyden-kamrás migrációs, Matrigel-alapú inváziós és scratch wound assay-vel vizsgáltuk. Kísérleteink mindkét sejtvonal esetében szignifikáns csökkenést mutattak a SEPTIN7-csendesített sejtek általunk vizsgált aktivitásában a nem-targetáló RNS-sel kezelt mintákhoz képest. A szekvenálás és a transzkriptomikai elemzés eredményei feltárták, hogy a SEPTIN7 csendesítése az A2058 sejtek a citoszkeletális átrendeződést és a sejtvándorlást szabályozó gének expressziójának jelentős változását eredményezte, míg a WM35 sejtekben kevésbé markáns, de hasonló irányú mintázatokat mutatott. Munkánk során sikeresen csendesítettük a komplex septin struktúrák képzésében kulcsfontosságú SEPTIN7-et, és igazoltuk a SOCE-ra gyakorolt hatását. Mindemellett megerősítettük a septin filamentumok dinamikájának farmakológiai gátlása kapcsán szerzett tapasztalatainkat, melyek szerint a septinek és a SOCE kapcsolata alapvető szerepet játszhat a melanóma patomechanizmusában. Eredményeink klinikai szempontból is hasznosítható tapasztalatokat nyújtanak.