Investigations on two major factors involved in drug metabolism, cytochrome P450 2D6 and P-glycoprotein

Dátum
2007-01-18T18:50:32Z
Folyóirat címe
Folyóirat ISSN
Kötet címe (évfolyam száma)
Kiadó
Absztrakt

Kifejlesztettünk egy hatékony és reprodukálható módszert a teljes hosszúságú 1,5 kb CYP2D6 mRNS trasnzkriptumok kimutatására és kvantifikálására, mely bármely szövetminta és sejtkultúrán alkalmazható. A CYP2D6 aktivitás szorosabb összefüggést mutatott a teljes hosszúságú CYP2D6 mRNS koncentrációval mint a rövid szakasz mRNS meghatározással nyert eredménnyel, amelyet real-time PCR segítségével határoztunk meg. Ez a hatékony szemikvantitatív módszer hasznos lehet egyéb mRNS transzkriptumok kimutatására is. A különböző körülmények között nyert májszöveteket, így a kontroll (májbetegséggel nem rendelkező egyének), májbiopszián átesett, máj transzplantált, és máj bankból származó máj homogenizátumok CYP2D6 aktivitását egy új szubsztrát, az R-568 segítségével vizsgáltuk, mely 20-szor szenzitivebbnek bizonyult mint a CYP2D6 enzim aktivitás jellemzésére korábban használt dextromethorphan. Az új módszer segítségével lehetővé válik néhány milligrammnyi szövet mennyiségből is az enzim aktivitás meghatározása. A négy csoportba sorolt májmintákat a 6 leggyakoribb genetikai variánsnak megfelelően genotipizáltuk (*3, *4, *5, *6, *7 és *8). Az allélok előfordulása az irodalmi adatokkal megegyező volt. Az eredményeink alapján a genotípus és a mRNS szint együttes meghatározása a CYP2D6 aktivitás kvantitatív becslésére biztonsággal alkalmazható egészséges májszövetminták esetén. Humán sejtvonalakból származó DNS felhasználásával PCR és Southern blot alkalmazásával jellemeztük az MDR1 gén szekvenciát és igazoltuk, hogy a gén nagy valószínűséggel 209 kb hosszú.

Leírás
Kulcsszavak
Forrás