Kataláz enzim aktivitás és oxigén koncentráció meghatározása vérmintákban
Absztrakt
Bevezetés: A kataláz a humán erythrocytákban magas aktivitással van jelen. Az enzim meghatározására különböző módszereket dolgoztak ki: volumetriás, H2O2 mérésen alapuló, polarográfiás és spektrofotometriás mérések. Célkitűzés: A diplomadolgozatom készítésével célom volt K3-EDTA-val alvadásgátolt vérmintákban mérni a kataláz aktivitást spektrofotometriás módszerrel, illetve oldott oxigén meghatározáson alapuló módszerrel. A célom volt, az oldott oxigénmérő készüléket alkalmassá tenni a vérmintákból történő mérésre és a mérési körülményeket optimalizálni. Összehasonlító elemzést készíteni a mért és számított eredményekből. Anyagok és módszerek: A spektrofotometriás mérések során 1997-ben leírt fotometriás módszert alkalmaztuk és a méréseinket a Human HumaLyzer Primus fotométeren végeztük. Az oldott oxigén koncentráció meghatározásához a HACH HQ30D digitális multimétert és a HACH Intellical LDO101 laboratóriumi lumineszcenciás/optikai oldott oxigén érzékelőt alkalmaztuk. Az oldott oxigén koncentráció méréshez 10,3 mL minta térfogatot, 37 ˚C, saját készítésű mérőedényt alkalmaztunk. A hemolizált vérminta 100-szoros hígítását alkalmaztuk. Vizsgálati eredmények: Reprodukálhatósági vizsgálatot végeztünk (n=15, Xátlag=317,83 MU/L, SD=154,38, CV=0,49). 21 mintában mértük az oldott oxigén koncentrációt (Coxigén=0,19-0,90 mg/L) és a kataláz aktivitását spektrofotometriásan (kataláz aktivitás=60,71-135,12 MU/L). Számítottuk a kataláz enzim aktivitásokat (kataláz aktivitás=92,83-510,56 MU/L) és az elméleti oxigén felszabadulást (Coxigén=0,09-0,20 mg/L). Összehasonlító elemzést készítettünk. A spektrofotometriás kataláz aktivitás és a keletkező oxigénből számolt enzim aktivitások közötti eltérés átlagosan=2,5x-es. Megbeszélés: Az eredmények összegzése alapján megállapítottuk, hogy a HACH HQD30 digitális multiméter és a HACH Intellical LDO101 laboratóriumi lumineszcenciás/optikai oldott oxigén érzékelő készülék az általunk alkalmazott körülmények között a vérkataláz szubsztrát bontása során keletkező oldott oxigén koncentrációjának meghatározására nem alkalmas.