Az Aspergillus fumigatus fonalas gomba Afu3g10930 gén kiütéséhez használandó plazmidkonstrukció elkészítése

Dátum
Folyóirat címe
Folyóirat ISSN
Kötet címe (évfolyam száma)
Kiadó
Absztrakt

A konstrukció létrehozásához első lépésben digitális úton megterveztük a konstrukciót a Benchling online felületén. Így azt is tudtuk milyen enzimekre lesz szűkségünk munkánk során. A genomi DNS izolációját követően PCR-rel felsokszorosítottuk homológ szakaszainkat és a Hygromycin szekvenciákat. A pYTK001 plazmidot a HincII enzim segítségével lineraizáltuk majd beépítettük ez fragmenseinket Upstream homológ, Hygormycin és Downstream homológ sorrendben. A fragmensek összeállításához a NEBuilder HiFi DNS Assembly Master Mix-et használtuk. Ezek után a plazmidokat E.coli sejtekbe transzformáltuk. Az sfGFP rioporter gén jóvoltából UV fény alatt ellenőrizni tudtuk azokat a telepeket, melyekbe nem épült be a plazmid. További ellenőrzés végett a transzformált telepeket is megvizsgáltuk. Ehhez ScaI és XhoI enzimek emésztésére volt szűkség. Az így kapott fragmentjeinket újra megvizsgáltuk géleketroforézissel. Végeredményként sikerült olyan telepeket növeszteni, melyek a megfelelő sorrendben tartalmazzák a fragmenteket. Így ezek a konstruciók felhasználhatóak a következőkben Aspergillus fumigatus fonalas gomba transzformálásra. Ezáltal az Afu3g10930 deléciós mutánsokban vizsgálható lesz ez a génfunkció.

Leírás
Kulcsszavak
aspergillus, fumigatus, HiFi, genomszeresztés
Forrás