Szerző szerinti böngészés "Nagy, Cynthia Nóra"
Megjelenítve 1 - 4 (Összesen 4)
Találat egy oldalon
Rendezési lehetőségek
Tétel Korlátozottan hozzáférhető In-line proteolitikus enzimreaktor kifejlesztése kapilláris elektroforézissel kapcsolt tömegspektrometriás vizsgálatokhozSzabó, Dávid Ruben; Gáspár, Attila; Nagy, Cynthia Nóra; DE--Természettudományi és Technológiai Kar--Kémiai IntézetA fehérjék kvalitatív analízisének egyik legelterjedtebb módja a bottom-up módszer, mely során a vizsgált fehérjét peptidekre bontják specifikus proteáz enzimekkel. Az így kapott peptideket egymástól elválasztják (pl. kapilláris elektroforézissel (CE)), majd azokat tömegspektrometriásan detektálják. A fehérjék oldatfázisban történő enzimes emésztése sok időt vesz igénybe, mivel az enzim csak kis koncentrációban alkalmazható az önemésztés elkerülése érdekében. Emiatt gyakran alkalmaznak enzimek immobilizálásával létrehozott reaktorokat, amik nagyobb enzimkoncentráció alkalmazását és ezáltal jóval gyorsabb emésztést tesznek lehetővé. Munkám során CE kapilláris elején hoztunk létre immobilizált enzimreaktort tripszin adszorpciójával. Az így kialakított reaktor aktivitását befolyásoló tényezőket vizsgáltuk. A reaktoron a megállapított ideális paramétereket alkalmazva humán szérumalbumin in-line emésztését végeztük el (~7 perc reakcióidő). Ennek hatásfoka csak alig maradt el az oldatban (16 óra alatt) végzett emésztés hatásfokától.Tétel Korlátozottan hozzáférhető Könnyminták fehérjetartalmának tripszines bontása mikrofluidikai enzimreaktoronNagy, Cynthia Nóra; Gáspár, Attila; Kecskeméti, Ádám; DE--Természettudományi és Technológiai Kar--Kémiai IntézetMunkánk során egy olyan mikrofluidikai csipet dolgoztunk ki, mely alkalmas könnyminták fehérjetartalmának gyors és hatékony emésztésére. Szemben az oldatban való emésztéssel, mely 16 órát vesz igénybe, a kifejlesztett enzimreaktort alkalmazva a fehérjeemésztés reakcióideje ~ 1 perc. A vizsgálatokhoz 10 μl térfogatú mintákat használva a teljes folyamat 35 percig tart, mely magába foglalja az immobilizálást (10 perc) és a nem megkötődött tripszin eltávolítását (10 perc) is. A reaktor kis mintatérfogatot igényel, így a korlátozott térfogatokban rendelkezésünkre álló könnyminták emésztése is megvalósítható. A tervezett mikrofluidikai csip nagy mintafeldolgozó képességgel rendelkezik, mivel a kialakítása révén egyszerre 8 minta emésztése is kivitelezhető. A kapott CZE peptidtérképek alapján nincs számottevő eltérés az oldatban, illetve a reaktoron történő emésztés hatékonysága között. Habár a PDMS felületén adszorbeált tripszin viszonylag gyorsan elveszti aktivitását (2 óra), a PDMS csipek eldobható tulajdonságukból fakadóan (a felsorolt előnyök figyelembe vételével), a reaktorral való emésztés vonzó alternatívája lehet az oldatban emésztésnek.Tétel Szabadon hozzáférhető Mikrofluidikai immobilizált enzimreaktorok kialakítása proteomikai alkalmazásokhozNagy, Cynthia Nóra; Gáspár, Attila; Kémiai Tudományok Doktori Iskola; Debreceni Egyetem::Természettudományi és Technológiai Kar; Debreceni Egyetem::Természettudományi és Technológiai Kar::Kémiai Intézet::Szervetlen és Analitikai Kémiai TanszékPhD munkám során mikrofluidikai immobilizált enzimreaktorok kifejlesztésével foglalkoztunk, melyek jelentősen lecsökkentik a bottom-up proteomikai munkafolyamatok időigényét, ezen belül is a fehérjék enzimatikus emésztését. Ezen mikroreaktorok nagyságrendekkel gyorsabb emésztéseket tesznek lehetővé (oldatfázisban végbemenő reakcióknál megszokott 16 óra hosszú reakcióidő helyett percek alatt végbemegy az emésztés). A mikroreaktorokat off-line (mikrofluidikai csipek) és in-line (kvarckapilláris) elrendezésben alakítottuk ki. A peptidelegyek CZE-MS/MS elemzését megelőző sómentesítés hatását is megvizsgáltuk, tekintettel a lehetséges mintaveszteségre és a különböző mintamátrixok által előidézett on-line minta-stacking jelenségekre.Tétel Korlátozottan hozzáférhető Nagy fajlagos felületű enzimreaktorok kifejlesztése polidimetilsziloxánból készült mikrocsipekbenNagy, Cynthia Nóra; Kecskeméti, Ádám; Gáspár, Attila; DE--Természettudományi és Technológiai Kar--Kémiai IntézetA mikrofluidika célja olyan eszközök kialakítása, melyek lehetővé teszik az akár nl-nél kisebb térfogatú mintákkal való munkát. Mikrocsipek csatornarendszerében kialakíthatók olyan reaktorok, melyek immobilizált enzimet tartalmaznak. Belátható, hogy minél nagyobb a fajlagos felület, annál több enzim immobilizálható a felületre, ezért célunk a felület/térfogat arány növelése volt. A fajlagos felületet miniatürizálással lehet növelni, azonban ennek megvannak a korlátai, mely a mikrocsip készítés általunk használt ún. lágy litográfiás technikájának természetéből fakad. A megtervezett struktúrával rendelkező csipek elkészítése során fellépő nehézségeket a mikrofabrikációs eljárás optimalizálásával oldottuk meg. A kifejlesztett reaktorok hatékonyságát szarvasmarha szérumalbumin (BSA) emésztését követő CE-MS/MS vizsgálatokkal jellemeztük.