Molekuláris Sejt- és Immunbiológia Doktori Iskola

Állandó link (URI) ehhez a gyűjteményhez

https://hdl.handle.net/2437/31600

Általános Orvostudományi Kar

Molekuláris Sejt- és Immunbiológia Doktori Iskola
(vezető: Dr. Balogh István)

Orvostudományi doktori tanács

D183

tudományág:
- elméleti orvostudományok

Böngészés

Molekuláris Sejt- és Immunbiológia Doktori Iskola Szerző szerinti böngészés "Bacsó, Zsolt"

Megjelenítve 1 - 4 (Összesen 4)
  • Nincs kép
    TételSzabadon hozzáférhető
    A P-glikoprotein szerkezetének és fehérje interakcióinak vizsgálata keresztkötéses tömegspektrometriával
    Gellén, Gabriella; Bacsó, Zsolt; Gellén, Gabriella; Molekuláris sejt- és immunbiológia doktori iskola; Debreceni Egyetem::Általános Orvostudományi Kar
    Az ABC transzporterek családjába tartozó P-glikoproteinről (Pgp) ismert, hogy részt vesz a tumorsejtek multidrog-rezisztenciájában. A koleszterin és egyéb lipidek kulcsfontosságú szerepet játszanak a Pgp konformációinak kialakításában, ennek azonban a hagyományos szerkezetbiológiai technikákkal történő tanulmányozása igen körülményes. Kísérleteink során újszerű, robusztus mintaelőkészítési módszereket alkalmaztunk keresztkötéses tömegspektrometriás (XL-MS) analízishez, lehetővé téve a Pgp szerkezetének vizsgálatát, annak természetes lipidkörnyezete megtartása mellett. Két kísérleti megközelítést alkalmaztunk: (i) az élő sejteket kezeltük keresztkötőkkel, majd membránpreparálást követően dúsítottuk a keresztkötött Pgp komplexeket; (ii) a keresztkötést az immunprecipitációs gyöngyökön végeztük a membránpreparálást és dúsítást követően. A keresztkötött komplexeket extracellulárisan kötődő monoklonális Pgp-ellenes antitestekkel dúsítottuk mágneses gyöngyökön, majd a gyöngyök felszínén történt az enzimatikus emésztés. Az LC-MS/MS eredmények alapján azonosított mono-linkek a Pgp oldószer számára hozzáférhető aminosav-oldalláncait segítettek feltérképezni. A Pgp-n belüli keresztkötések megerősítették a fehérje extracelluláris, transzmembrán és intracelluláris szegmensei közötti kölcsönhatásokat, melyekről ismert, hogy koleszterinérzékenyek. Tömegspektrometriás eredményeinket irodalmi adatokkal és molekuladokkolással kiegészítve meghatároztuk a 15D3 koleszterinfüggő monoklonális antitest epitópját. Emellett az azonosított Pgp fehérjepartnerek bizonyítják a Pgp szoros kapcsolatát a citoszkeletonnal és egyéb koleszterin által szabályozott fehérjékkel. Eredményeink azt sugallják, hogy az XL-MS felhasználható fehérjeszerkezet- és hálózatelemzésekre olyan összetett rendszerekben is, mint a membránfehérjék.
  • Nincs kép
    TételKorlátozottan hozzáférhető
    Egy ígéretes fotodinámiás kismolekula, a diMICAAc hatásainak sejtbiológiai vizsgálata
    Bankó, Csaba; Bacsó, Zsolt; Bankó, Csaba; Molekuláris sejt- és immunbiológia doktori iskola; DE--Általános Orvostudományi Kar -- Biofizikai és Sejtbiológiai Intézet
    A Debreceni Egyetem Alkalmazott Kémia Tanszéke által szintetizált három új akridinvázas vegyület, az ICAAc, monoMICAAc és diMICAA összehasonlító vizsgálatára került sor. A vizsgált vegyületek közül a diMICAAc volt a legígéretesebb, a mutatott fluoreszcencia és sejtpermeabilitás alapján. Az értekezés további részében a diMICAAc vagy DM és a mindössze egy funkciós csoportban különböző ismert fluoreszcens festék az akridin-narancs (AN) összehasonlító elemzésével kapcsolatos kísérletek leírását ismerhetjük meg. Az új eredmények összefoglalása alapján elmondható, hogy a két vegyület támadáspontja különböző, az AN DNS károsító hatásával, míg a DM elsősorban az intracelluláris membránrendszerek (lizoszómák) károsításával fejti ki citotoxikus hatását. A kísérleti eredmények alapján elmondható, hogy a DM az AN-hez hasonló vagy annál is ígéretesebb PDT festék lehet.
  • Nincs kép
    TételSzabadon hozzáférhető
    P-glikoprotein alap és koleszterin-függő trafficking folyamatainak vizsgálata
    Gutayné Tóth, Zsuzsanna; Bacsó, Zsolt; Tóth, Zsuzsanna; Molekuláris sejt- és immunbiológia doktori iskola; DE--Általános Orvostudományi Kar -- Biofizikai és Sejtbiológiai Intézet
    A humán multidrog rezisztencia transzporter, P-glikoprotein megtalálható a plazmamembrán raft és nem-raft doménjeiben is. A Pgp azon konformációs állapota (Pool1), mely az UIC2 antitesttel azonosítható nagyobb mértékű raft asszociációt mutat, fokozott internalizációval rendelkezik és recirkulál a sejtfelszínre. A plazmamembrán ciklodextrinnel történő koleszterin depléciója ezen raft asszociált Pgp frakció nem várt emelkedését eredményezte, mely emelkedés hátterében a transzporter fokozott exocitózisa állt. Ezen exocitótikus események koleszterin kivonást követően egy lizoszómális exocitózis által indított komplex membrán repair folyamat részeként valósultak meg. Kísérleteink alapján a Pgp-t nagy mennyiségben expresszáló 3T3-MDR1 egér sejtvonal nagyobb mennyiségű koleszterint, több és stabilabb lizoszómákat tartalmazott, és ennek megfelelően hatékonyabb membrán repairrel rendelkezett, a parentális sejtvonallal összehasonlítva. Ennek eredményeként a Pgp-t expresszáló multidrog rezisztens sejtek jobb életképeségeket mutattak a plazmamembrán koleszterin modulációját követően.
  • Nincs kép
    TételKorlátozottan hozzáférhető
    Perspectives of Imaging Cytometry and its Implication in High Content Screening
    Minh, Doan; Bacsó, Zsolt; Molekuláris sejt- és immunbiológia doktori iskola; DE--Általános Orvostudományi Kar -- Biofizikai és Sejtbiológiai Intézet
    The dissertation provides an overview of advancements in high-content screening techniques, with special focus on slide-based imaging cytometry. Contemporary studies that utilized this technology have been highlighted. The review has discussed both the significances, benefits as well as limitations of high-content and high-throughput analyses in different investigations, namely cell cycle analysis, immunophenotyping, quantitative histo-cyto-pathology, cell health analysis, and pharmacology/toxicology. In addition to the review sections, the thesis has also demonstrated four studies that were conducted by the author and his collaborations: High-content analysis of adipocyte differentiation; High-throughput screening of protein-protein interactions; Detection of DNA damage in differentiating cells; and Study of polarization signaling pathway in dendritics. These studies exemplified the successful adoptions of laser scanning cytometry into studying cell biology. Moreover, these studies have shown valuable results with both methodological and biological significance. Namely, the author has shown improved cell recognition in heterogeneous, attached cell culture at high confluence; the valuable application of textural analysis in inspection of cellular morphology; pixel-by-pixel FRET map of protein heterodimerization in large number of attached cells; and proofs of the accumulation of low-grade DNA damage during cell differentiation. The demonstrated applications belong to various orientations and are indeed excellent representatives of objective quantitative cytometry. The establishment of such useful screening platform of the workgroup is encouraging and of great potential, which can effectively serve multiple purposes across different research fields in biology and health cares.